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靈芝酸DM173075-45-1標準品/對照品采用細胞培養(yǎng)和T-A克隆技術(shù),在輪狀病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白VP7基因序列上設(shè)計合成引物,經(jīng)PCR擴增后將特異性產(chǎn)物連接入pGEM-T-easy載體中,經(jīng)過酶切鑒定和測序分析獲得輪狀病毒cDNA標準品.  利用常規(guī)PCR和實時定量PCR方法對所獲得的cDNA標準品進行特異性、穩(wěn)定性和重復(fù)性指標的檢驗.

結(jié)果表明,利用此標準品制備的標準曲線具有較高的擴增效率和良好的線性關(guān)系(斜率為-3.353,R2=0.995);實時定量PCR熔解曲線分析表明,溫度在81℃±0.5℃的PCR產(chǎn)物是輪狀病毒VP7序列上的特異性產(chǎn)物,表明此標準品是輪狀病毒特異性的;

同時,所制備的標準品在實時定量PCR檢測中具有較大的線性范圍(9×100~9×1011copies/μL,每個反應(yīng)低可以檢測到9個拷貝數(shù)的輪狀病毒cDNA,表明利用該標準品進行實時定量PCR分析時具有較高的檢測靈敏性;

此外,該標準品具有較高的穩(wěn)定性和重復(fù)性(3次獨立實驗CV值在0.2%~0.9%之間),可長期穩(wěn)定保存.構(gòu)建的標準品可用作檢測水環(huán)境中輪狀病毒的實時熒光定量PCR的外標準品.

桑寄生 英文名稱 TLC法鑒別  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 

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辛夷（望春花） 英文名稱 TLC法鑒別  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn)