犬CRP ELISA是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于犬血清和血漿樣本中C-反應蛋白（CRP）的測定。

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犬C-反應蛋白ELISA檢測原理：

雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定（ELISA）的原理如圖1所示。在這種測定中，樣品中的C反應蛋白（CRP）與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗CRP抗體發生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的抗CRP抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的CRP形成復合物。經過再次洗滌后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）來測定與免疫吸附劑結合的酶。結合的酶量與測試樣品中CRP的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中CRP濃度的量度。測試樣品中CRP的量可以從標準曲線中插值得出，并根據樣品稀釋進行校正。

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料應視為潛在危險。處理和處置時遵循通用預防措施。如果血液樣品出現凝塊、嚴重溶血、脂血或樣品完整性受到質疑，請記錄并謹慎解釋結果。以下列出的樣品收集和儲存條件僅供參考。樣品穩定性尚未評估。

? 血清樣品 - 應通過靜脈穿刺收集血液。血凝后通過離心分離血清。取出血清立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融。

? 血漿樣品 - 應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融。

? 已知干擾物質 - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應。

樣品稀釋

定量測定樣品中CRP的測定要求每個測試樣品在使用前進行稀釋。每次進行測定時，所有樣品都應以雙份進行測定。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋比例應基于未知樣品的預期濃度，以便稀釋后的樣品落在標準曲線的動態范圍內。如果不確定樣品水平，在運行整個板之前，強烈建議對一個或兩個代表性樣品進行系列稀釋。

血清和血漿樣品 - 推薦的起始稀釋比例是1:1000。要制備1:1000的樣品稀釋液，將5 ?L的樣品轉移到495 ?L的1X工作稀釋液中。這會產生1:100的稀釋比例。接下來，將1:100的樣品通過將40 ?L轉移到360 ?L的1X工作稀釋液中進行稀釋。這會產生1:1000的樣品稀釋比例。每個階段都要C底混合。

試劑準備

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮物 - 提供的稀釋液為5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮物，4份dH2O）按1:5稀釋。

洗滌液濃縮物 - 提供的洗滌液為20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮物，19份dH2O）按1:20稀釋。濃縮物在低溫儲存時可能會形成晶體。稀釋前將濃縮物加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶-抗體結合物 - 通過向每個微孔板測試條使用的1X工作稀釋液中添加10 ?L酶-抗體結合物和990 ?L來計算每個微孔板測試條所需的1X工作結合物溶液量。均勻混合，但要輕柔。避免產生泡沫。

預包被ELISA微孔板 - 按提供的狀態使用。打開微孔板袋，從袋中取出板。取出在測定中不會使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封，同時放回干燥劑。

結果計算

1. 從每個孔的值中減去平均背景值（標準零的平均吸光度讀數）。

2. 對每個標準的平均重復讀數進行平均，并使用結果構建標準曲線。通過使用能夠生成四參數邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數據來構建標準曲線。也可以使用二次多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數據的擬合精度會較低。

3. 從標準曲線中插值得到測試樣品值。校正血清稀釋因子，以得出原始樣品中的CRP濃度。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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