干細胞靜態懸浮培養方案:

VitroGel STEM 是一種無異種蛋白的水凝膠系統，用于提高三維（3D）培養的性能和擴大人類多能干細胞（hPSCs）群體的規模，以創建一個高通量系統來模擬各種組織和疾病狀態。VitroGel STEM 是即用型的，具有優化的配方，w全支持快速擴展具有多能性的高質量3D干細胞球體。水凝膠系統可以通過不同的培養方法支持3D細胞生長，如3D水凝膠包埋、2D厚水凝膠涂層、水凝膠-細胞珠和靜態懸浮培養。

在本協議中，我們將重點介紹使用VitroGel STEM進行干細胞球體擴增和規模化生產時的靜態懸浮培養方法。從液氮中直接解凍的hPSCs或從2D基質涂層培養容器中傳代的hPSCs可以立即與水凝膠溶液混合進行靜態懸浮培養。此外，優化的協議非常適合時間敏感的實驗，因為它不需要頻繁的培養基更換，這最終可以節省時間和材料。VitroGel STEM與大多數hPSC培養基和組織培養容器兼容。由于d特的靜態懸浮培養協議方法，在大規模生物反應器中使用時不需要微載體，從而使細胞收獲更加簡單和高效。使用VitroGel STEM生產的3D干細胞球體可以用于進一步的亞培養、模式分化或重新建立2D培養形態。

作為TheWell Bioscience中國區代理，艾美捷科技強烈推薦TheWell Bioscience銷售產品VitroGel STEM。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

工作流概述:

初始靜態懸浮培養協議：

推薦材料和試劑

VitroGel STEM

干細胞培養基（mTeSR‐PLUS, StemFlex, mTeSR‐1, Essential 8, NutriStem hPSC 等）

Y‐27632（10 mM/mL）

VitroGel 細胞回收溶液（產品編號 MS03‐100）（可選）

40、70 或 100 µm 可逆篩網（可選）

細胞解離溶液（可選）

圓錐形管（15 mL 或 50 mL）

血清學吸管

細胞培養容器（孔板、T 瓶、Erlenmeyer 燒瓶）

注意：VitroGel STEM 與多種培養容器兼容，用于在靜態懸浮培養中生長干細胞。根據每個實驗室所需的培養規模和可用系統，可能需要針對不同細胞類型優化培養體積。

設備:

生物安全柜（II級）

CO2 培養箱（37°C，5% CO2 和 95% 濕度）

離心機

移液管

旋轉搖床、攪拌式反應器或低速生物反應器（10-40轉/分鐘，可選）

參考數據:

圖1。二維基質培養hPSC的三維懸浮培養

如圖1所示，24小時后，小的hPSC球體開始形成。從第1天到第6天，懸浮培養物中的細胞迅速生長，導致健康的

以及高質量的干細胞球體。第3天，細胞數量急劇增加（圖1B），球體大小穩步增加（圖1C）。hPSC球體顯示

淺坑或麻點的特征，指示hPSC標志物的表達，以及健康和高質量干細胞球體的成功擴增。這個

這些球體為研究人員提供了大量健康的hPSC，用于進一步的實驗

TheWell Bioscience公司專注于3D細胞培養產品，為細胞再創體內生長環境。VitrogelTM3D 細胞培養水凝膠為無動物源性多糖水凝膠體系，模仿天然細胞外基質環境，可用于懸浮細胞和貼壁細胞的培養，為體內和體外研究提供共通的操作平臺。

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