重組腺病毒在研究和治療應(yīng)用中具有巨大的潛力。它們?cè)趯⑦z傳物質(zhì)引入宿主細(xì)胞時(shí)提供了諸多優(yōu)勢(shì)，宿主細(xì)胞范圍非常廣泛。該病毒已被用于感染許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞類(lèi)型（包括增殖性和非增殖性細(xì)胞），以實(shí)現(xiàn)重組蛋白的高效表達(dá)。重組腺病毒尤其適用于那些通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率較低的細(xì)胞系中的基因轉(zhuǎn)移和蛋白表達(dá)。病毒進(jìn)入細(xì)胞后，保持染色體外狀態(tài)（即不整合到宿主染色體中，因此不會(huì)激活或失活宿主基因）。最近，重組腺病毒已被用于將RNAi導(dǎo)入細(xì)胞。

HEK293細(xì)胞或其變體被用作病毒擴(kuò)增的宿主細(xì)胞。重組腺病毒可以在高滴度下生長(zhǎng)（101?病毒顆粒/mL，可濃縮至1013病毒顆粒/mL），并可通過(guò)CellBiolabs的ViraBind™腺病毒純化試劑盒或傳統(tǒng)的CsCl超速離心法進(jìn)行純化。

通過(guò)病毒載體傳遞基因的一個(gè)特別挑戰(zhàn)是準(zhǔn)確測(cè)量病毒滴度。傳統(tǒng)上，通過(guò)培養(yǎng)中的噬菌斑形成單位（PFU）測(cè)定感染性顆粒，該方法根據(jù)稀釋度計(jì)算病毒噬菌斑的數(shù)量。其他方法則利用抗體通過(guò)免疫組化染色或流式細(xì)胞術(shù)（FACS）分析識(shí)別腺病毒六鄰體蛋白。這些方法耗時(shí)較長(zhǎng)，需要較長(zhǎng)的感染周期，且存在較高的實(shí)驗(yàn)間差異，并受病毒-細(xì)胞相互作用的影響。對(duì)于高純度病毒樣本，可通過(guò)260nm的光吸收度估算病毒顆粒的總數(shù)。然而，這種方法不能用于未純化的病毒上清液，因?yàn)槠渲械哪承┏煞謺?huì)對(duì)260nm的光吸收度產(chǎn)生貢獻(xiàn)。

艾美捷QuickTiter腺病毒滴度檢測(cè)試劑盒（#VPK-106）不涉及細(xì)胞感染，而是特異性地測(cè)量純化病毒或未純化病毒上清液樣本中的病毒核酸含量。特別是對(duì)于未純化的病毒上清液，該試劑盒在純化步驟之前確定上清液滴度方面非常有用。試劑盒的檢測(cè)靈敏度下限為1×10?病毒顆粒或1×101?病毒顆粒/mL（當(dāng)使用100µL腺病毒上清液進(jìn)行檢測(cè)時(shí)），這對(duì)于中高滴度的腺病毒樣本是足夠的。整個(gè)過(guò)程大約需要45到60分鐘。每套試劑盒提供足夠的試劑，可進(jìn)行多達(dá)20次病毒樣本和對(duì)照的檢測(cè)。

QuickTiter™腺病毒定量試劑盒為純化病毒和病毒上清液的腺病毒滴度快速定量提供了一個(gè)高效的系統(tǒng)。

相關(guān)產(chǎn)品：

1.AD-100：293AD細(xì)胞系

2.AD-200：ViraDuctin™腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑

3.VPK-099：ViraBind™腺病毒小量純化試劑盒

4.VPK-109：QuickTiter™腺病毒滴度免疫測(cè)定試劑盒

5.VPK-110：QuickTiter™腺病毒滴度ELISA試劑盒

6.VPK-111：快速RCA測(cè)定試劑盒

7.VPK-252：RAPAd®CMV腺病毒表達(dá)系統(tǒng)

QuickTiter腺病毒滴度檢測(cè)試劑盒組成（藍(lán)色冰袋運(yùn)輸）：

1.QuickTiter™溶液A（部件編號(hào)40020）：一瓶，200µL。

2.QuickTiter™腺病毒捕獲溶液（部件編號(hào)40021）：一瓶，1.0mL。

3.QuickTiter™溶液B（10倍）（部件編號(hào)40022）：兩瓶，每瓶1.8mL。

4.QuickTiter™溶液C（2倍）（部件編號(hào)40023）：兩瓶，每瓶1.5mL。

5.CyQuant®GR染料（400倍）（部件編號(hào)105101）：一瓶，50µL。

6.QuickTiter™腺病毒DNA標(biāo)準(zhǔn)品（部件編號(hào)40025）：一瓶，500µL，含100µg/mL腺病毒DNA標(biāo)準(zhǔn)品。

未提供材料：

1.感興趣的重組腺病毒：純化或未純化的高滴度病毒上清液

2.HEK293細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)培養(yǎng)基

3.細(xì)胞培養(yǎng)離心機(jī)

4.0.45µm濾膜

5.含10mMMgCl?、1mMCaCl?的1倍PBS

6.1倍TE（10mMTris，pH7.5，1mMEDTA）

7.熒光酶標(biāo)儀

儲(chǔ)存：

將所有試劑盒組分儲(chǔ)存于4°C。

安全注意事項(xiàng)：

請(qǐng)記住，您將處理含有感染性病毒的樣本。請(qǐng)遵循NIH推薦的針對(duì)BSL-2生物體的所有材料的指南。

結(jié)果示例：

以下圖表展示了典型的定量結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實(shí)際結(jié)果。 

圖1：腺病毒DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。QuickTiter™腺病毒DNA標(biāo)準(zhǔn)品按照上述說(shuō)明進(jìn)行稀釋。使用MolecularDevice的SpectraMaxGeminiXS熒光計(jì)（帶485/538nm濾光片組和530nm截止濾光片）進(jìn)行熒光測(cè)量。

QuickTiter腺病毒滴度檢測(cè)試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. Wu N and Ataai M. M (2000) Curr Opin Biotechnol. 11(2):205-8.

2. Mizuguchi et al., (2001) Advanced Drug Delivery Reviews 52:165–176.

3. Vorburger, S. A. and Hunt, K. K. (2002) Oncologist 7:46–59.