PDE5A1實驗試劑盒是一種基于熒光偏振（FP）的均相96孔實驗試劑盒，專為篩選和分析PDE5A1（磷酸二酯酶5A1）抑制劑而設計。該實驗利用了一種特異性的熒光磷酸結合納米顆粒。試劑盒包含足夠量的純化重組PDE5A1、熒光探針、PDE實驗緩沖液、結合劑和稀釋液，可進行100次反應。

艾美捷PDE5A1檢測試劑盒：

貨號：BPQ-60350

別名：cGMP特異性3',5'-環狀磷酸二酯酶，cGMP結合的cGMP特異性磷酸二酯酶，CGB-PDE，PDE5A，PDE5，PDE5-A1，PDE  

儲存/穩定性： 按照說明儲存時，該實驗試劑盒在收到之日起6個月內可達到最佳性能。  

實驗試劑盒形式：熒光偏振  

物種：人  

運輸溫度：-80°C  

科學分類：磷酸二酯酶（PDE）  

監管狀態：僅限研究使用。

應用：用于研究酶動力學和篩選小分子抑制劑，適用于高通量篩選（HTS）應用中的藥物發現。

提供材料：  

目錄編號 | 名稱 | 數量 | 儲存條件  

60050 | PDE5A1* | >1 µg | -80°C  

60201 | FAM-Cyclic-3′,5′-GMP | 2 x 1.2 nmol | -80°C  

60393 | PDE實驗緩沖液（未w全配方） | 25 ml | -20°C  

60390 | PDE結合劑 | 100 µl | 4°C  

60392 | 結合劑稀釋液（cGMP） | 10 ml | 4°C  

0.5 M DTT | 200 µl | -20°C  

79685 | 低吸附性黑色96孔板 | 1個 | 室溫  

蛋白質的濃度因批次而異，具體濃度將標注在含有蛋白質的管上。  

FAM-Cyclic-3′,5′-GMP以粉末形式提供。每支安瓿在使用前需用400 µl w全配方的PDE實驗緩沖液溶解。

所需材料（但未提供）：  

可調節微量移液器及無菌吸頭  

旋轉或搖床平臺  

能夠測量熒光偏振的熒光微孔板讀數儀（激發波長λex=470 nm（5 nm帶寬），發射波長λem=528 nm（10 nm帶寬））

注意事項：  

實驗中DMSO的最終濃度不應超過1%。  

具有λex=470 nm激發和λem=528 nm發射的熒光化合物可能會干擾實驗結果。  

建議單獨測試化合物，以確定其是否會對實驗結果產生潛在干擾。

結果計算：  

熒光偏振是衡量熒光探針在激發和發射之間發生分子旋轉量的指標。它可以通過測量探針相對于偏振激發光方向發出的垂直（I⊥）和平行（I‖）熒光強度值來確定。  

圖：熒光偏振原理  

A. 當熒光標記的探針與較大的蛋白結合時，會形成一個大分子量的復合物，該復合物的旋轉能力較弱。在這種狀態下，探針的旋轉擴散減少，因此當它被偏振光激發時，仍會發出高度偏振的光，其偏振度與分子旋轉速率成反比。  

B. 在存在與蛋白有親和力的化合物時，熒光探針保持在溶液中并能夠快速旋轉。未結合的探針具有較高的旋轉擴散，因此當它被偏振光激發時，會發出的光可以在垂直和平行濾光片中被檢測到。

文獻參考：

Ahmed W., et al., 2021 Biomedicine & Pharmacotherapy 134:111128.

Huang W., et al., 2020 Nat Commun 11:3191.