聚蛋白聚糖酶-1(ADAMTS-4,也稱為軟骨素酶-1)是解整合素和金屬蛋白酶家族(ADAMTS)的重要成員,主要參與軟骨素的降解。軟骨素是軟骨的主要結構成分,而ADAMTS-4在骨關節炎(OA)軟骨的退化過程中發揮關鍵作用。因此,檢測ADAMTS-4的活性對于研究骨關節炎的發病機制以及開發相關治療藥物具有重要意義。
SensoLyte 520聚蛋白聚糖酶-1活性檢測試劑盒是一種基于熒光共振能量轉移(FRET)原理的檢測試劑盒,專用于連續測量ADAMTS-4的酶活性。該試劑盒采用5-FAM作為熒光團,TAMRA作為猝滅劑的FRET肽底物。在完整的FRET肽中,5-FAM的熒光被TAMRA猝滅;當ADAMTS-4切割FRET肽時,5-FAM的熒光得以恢復,并可在激發/發射波長為490 nm/520 nm處連續監測。熒光強度的增加與ADAMTS-4的活性呈正相關,且由于其較長的發射波長,該底物受測試化合物自身熒光的干擾較小。
艾美捷SensoLyte 520聚蛋白聚糖酶-1活性檢測試劑盒:
貨號:AS-72114
吸收波長(nm):490
發射波長(nm):520
儲存條件:所有組分均需在-20°C下保存。組分A和B需避光并防潮。組分C和E可在室溫下保存以便于使用。
應用:
熒光共振能量轉移(FRET)
蛋白酶活性檢測
生物標志物靶點:ADAMTS-4(軟骨素酶)
檢測方法:熒光法
檢測下限:0.1 ng/ml
研究領域:細胞黏附與細胞外基質
子研究領域:細胞黏附蛋白
用途:僅限研究使用
試劑盒組成:
組分A:5-FAM/5-TAMRA,軟骨素酶-1底物,激發/發射波長=490 nm/520 nm:60 µL
組分B:5-FAM,熒光參考標準品,激發/發射波長=490 nm/520 nm:1 mM,10 µL
組分C:檢測緩沖液:20 mL
組分D:對照抑制劑:100 µM,10 µL
組分E:終止液:10 mL
優勢與特點
高靈敏度:熒光法檢測,靈敏度高,檢測下限低至0.1 ng/ml。
特異性高:基于FRET原理,特異性檢測ADAMTS-4活性,背景干擾低。
操作簡便:采用96孔板格式,適合高通量篩選。
穩定性好:試劑盒組分在-20°C下保存,有效期長達2年。
實驗結果示例
在一項實驗中,使用該試劑盒檢測A549細胞裂解液中的Phospho-p38,結果顯示FRET底物被ADAMTS-4切割后,5-FAM熒光顯著增加,表明試劑盒能夠有效檢測ADAMTS-4的活性。
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