嗜鉻粒蛋白A是一種49 kDa的酸性蛋白，由439個氨基酸組成，編碼于第14號染色體上。嗜鉻粒蛋白A在多種正常和腫瘤性內分泌組織中被發現。研究表明，循環中嗜鉻粒蛋白A水平升高是神經內分泌腫瘤的標志。

本ELISA（酶聯免疫吸附測定）試劑盒用于定量檢測人EDTA血漿和血清樣本中的嗜鉻粒蛋白A（Chromogranin A）水平。僅供研究使用，不得用于診斷程序。

艾美捷人CgA ELISA試劑盒【#43-CGAHU-E01】檢測原理：

本ELISA試劑盒專為定量測量人EDTA血漿或血清樣本中的嗜鉻粒蛋白A而設計、開發和生產。檢測采用雙位點“夾心"技術，使用兩種選定的抗體，分別結合人嗜鉻粒蛋白A的不同表位。標準品、質控品和樣本直接加入包被有多克隆嗜鉻粒蛋白A抗體的微孔板中。經過第一次孵育后，微孔板壁上的抗體捕獲樣本中的人嗜鉻粒蛋白A，未結合的蛋白被洗去。然后向每個微孔中加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗人嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體，形成“單克隆抗體 - 人嗜鉻粒蛋白A - 多克隆抗體"的“夾心"復合物。未結合的單克隆抗體在隨后的洗滌步驟中被去除。為了檢測這一免疫復合物，微孔與底物溶液孵育一定時間，然后在分光光度微孔板讀數儀中測量。結合在微孔壁上的免疫復合物的酶活性與樣本中嗜鉻粒蛋白A的量成正比。通過繪制標準品的吸光度與相應人嗜鉻粒蛋白A濃度的關系，并使用四參數曲線擬合，生成標準曲線。測試樣本中人嗜鉻粒蛋白A的濃度直接從該標準曲線上讀取。

試劑：準備與儲存

本試劑盒在收到后必須在2-8℃下儲存。試劑盒的有效期請參考試劑盒包裝上的標簽。所有組分在有效期前均穩定。

使用前請將所有試劑恢復至室溫。不同批次號的試劑盒組分不應混合或互換使用。

抗CgA抗體包被微孔板

描述：包被有人嗜鉻粒蛋白A抗體的微孔板。

數量：1 x 96孔微孔板

儲存條件：2-8℃

CgA示蹤抗體

描述：在穩定蛋白基質中的辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗人嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體。

數量：1 x 12 mL

儲存條件：2-8℃

CgA檢測緩沖液

描述：含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。

數量：1 x 30 mL

儲存條件：2-8℃

ELISA洗滌濃縮液

描述：含有非疊氮化物防腐劑的磷酸鹽緩沖液中的表面活性劑。

數量：1 x 30 mL

儲存條件：2-25℃

準備方法：30倍濃縮液。使用前需與870 mL蒸餾水混合均勻。

ELISA HRP底物

描述：含有穩定過氧化氫的四甲基聯苯胺（TMB）。

數量：1 x 12 mL

儲存條件：2-8℃

ELISA終止液

描述：0.5 M硫酸。

數量：1 x 12 mL

儲存條件：2-25℃

嗜鉻粒蛋白A標準品（1-6級）

描述：含有Proclin防腐劑的凍干牛血清白蛋白基質中的人嗜鉻粒蛋白A。每瓶的具體濃度請參考標簽。

數量：6 x 瓶

儲存條件：2-8℃（凍干），<-20℃（復溶）

注意事項：復溶后不超過3次凍融循環。

準備方法：需用0.5 mL去離子水復溶，靜置10分鐘，然后通過倒置或輕柔渦旋混合微孔。確保所有固體W全溶解后使用。

嗜鉻粒蛋白A質控品

描述：含有Proclin防腐劑的凍干牛血清白蛋白基質中的人嗜鉻粒蛋白A。每瓶的具體濃度請參考標簽。

數量：2 x 瓶

儲存條件：2-8℃（凍干），<-20℃（復溶）

注意事項：復溶后不超過3次凍融循環。

準備方法：需用0.5 mL去離子水復溶，靜置10分鐘，然后通過倒置或輕柔渦旋混合微孔。確保所有固體W全溶解后使用。

安全注意事項：

本試劑僅供研究使用。

含牛血清白蛋白的試劑原料來源于美國本土48個州。僅從在獸醫監督下飼養且未發現傳染性疾病的健康供體動物中獲取。

進行本檢測時請佩戴手套，并將這些試劑視為可能具有傳染性。

避免接觸含有過氧化氫或硫酸的試劑。

不要讓試劑進入眼睛、皮膚或衣物。

不要吞咽或吸入試劑的煙霧。

接觸后，用大量清水沖洗至少15分鐘。

使用良好的實驗室操作規范。

結果解讀：

質控品和樣本的人嗜鉻粒蛋白A濃度直接從標準曲線上讀取，使用其各自的校正吸光度值。

對于高于最高檢測標準90%的樣本，強烈建議將樣本用檢測緩沖液稀釋1:100后重新檢測，以獲得更準確的結果。例如，最高檢測標準約為2,500 ng/ml，任何顯示值大于2,250 ng/ml（2,500 ng/ml的90%）的樣本應以1:100稀釋后重新檢測。如果1:100稀釋的樣本仍高于最高檢測標準，可以選擇將樣本值報告為高于最高檢測標準（例如>2,500 ng/ml），或者進一步測量1:10,000稀釋的樣本。建議獲得位于標準水平2至水平4之間的稀釋樣本值，將該測量值乘以稀釋因子以獲得報告值。

示例數據與標準曲線：

展示了人嗜鉻粒蛋白A ELISA的典型吸光度數據和生成的標準曲線。此曲線不應替代每次檢測時運行的標準曲線。

文獻參考：

1. Pirker RA, Pont J, P?hnl R, Schütz W, Griesmacher A, Müller MM. Usefulness of chromogranin

A as a marker for detection of relapses of carcinoid tumours. Clin Chem Lab Med 1998;36:837-

40.

2. Kimura N, Miura W, Noshiro T, Mizunashi K, Hanew K, Shimizu K, et al. Plasma chromogranin

A in pheochromocytoma, primary hyperparathyroidism and pituitary adenoma in comparison

with catecholamine, parathyroid hormone and pituitary hormones. Endocr J 1997;44:319-27.

3. Hendy GN, Bevan S, Mattei MG, Mouland AJ. Chromogranin A. Clin Invest Med 1995;18:47-65.

4. Deftos LJ. Chromogranin A: its role in endocrine function and as an endocrine and

neuroendocrine tumor marker. Endocrine Reviews: 1991;12:181-7

5. Sobol RE, Memoli V, Deftos LJ. Hormone-negative, chromogranin A-positive endocrine tumors.

N Engl J Med 1989;320:444-7.