這種橙色的熒光鬼筆環(huán)肽綴合物（相當(dāng)于Alexa Fluor®555標(biāo)記的鬼筆環(huán)蛋白）選擇性結(jié)合F-actins。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是標(biāo)記、鑒定和定量甲醛固定和滲透組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)或無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中F-actins的方便探針。Phalloidin與肌動(dòng)蛋白絲的結(jié)合比與肌動(dòng)蛋白單體的結(jié)合更緊密，導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白亞基從絲端解離的速率常數(shù)降低，基本上通過(guò)防止絲解聚來(lái)穩(wěn)定肌動(dòng)蛋白絲。此外，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽抑制F-actin的ATP水解活性。Phalloidin在細(xì)胞中不同濃度下的作用不同。當(dāng)以低濃度引入細(xì)胞質(zhì)時(shí)，鬼筆環(huán)肽將聚合程度較低的細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白和絲蛋白募集到聚集的肌動(dòng)蛋白聚合物的穩(wěn)定“島"中，但它不會(huì)干擾應(yīng)力纖維，即粗的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是一種有用的工具，可以通過(guò)用熒光類似物標(biāo)記鬼筆環(huán)蛋白并將其用于在光學(xué)顯微鏡下染色肌動(dòng)蛋白絲來(lái)研究F-肌動(dòng)蛋白在細(xì)胞中的分布。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在活細(xì)胞或固定細(xì)胞中定位肌動(dòng)蛋白絲以及在體外可視化單個(gè)肌動(dòng)蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)的重要工具。AAT Bioquest提供各種不同顏色的熒光鬼筆環(huán)肽衍生物，用于多色成像應(yīng)用。

艾美捷鬼筆環(huán)肽-iFluor 555偶聯(lián)物：

貨號(hào) AAT-23119

偶聯(lián)物：iFluor 555

單位大小：300次測(cè)試

目錄編號(hào)：23100、23101、23102、23103、23110、23111、23115、23116、23117、23119、23122、23125

分子量：~1300

溶劑：DMSO

校正因子（260納米）：0.23

校正因子（280納米）：0.14

消光系數(shù)（cm -1 M -1）：100000

激發(fā)（納米）：557

發(fā)射（納米）：570

量子產(chǎn)率：0.64

預(yù)期用途：僅供研究使用（RUO）

儲(chǔ)存條件：冷凍（<-15°C）；盡量減少光照

協(xié)議概要：

在微孔板孔中準(zhǔn)備樣品

從板中的樣品中移除液體

加入Phalloidin-iFluor™ 555偶聯(lián)溶液（每孔100 μL）

在室溫下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行20至90分鐘的染色

洗滌細(xì)胞：

在顯微鏡下使用TRITC濾光片檢查樣本

重要事項(xiàng)     在打開(kāi)前將瓶加熱至室溫并短暫離心。

儲(chǔ)存和處理?xiàng)l件：

如果儲(chǔ)存在-20°C，溶液至少穩(wěn)定6個(gè)月。保護(hù)熒光偶聯(lián)物不受光線影響，并避免凍融循環(huán)。

注意     Phalloidin有毒，盡管一瓶中的毒素量可能只對(duì)蚊子致命（Phalloidin的LD50 = 2 mg/kg），應(yīng)小心處理。

工作溶液的準(zhǔn)備：

Phalloidin-iFluor™ 555偶聯(lián)工作溶液

將1 μL的Phalloidin-iFluor™ 555偶聯(lián)溶液加入到含1% BSA的PBS中，制成1 mL的工作溶液。

注意     Phalloidin偶聯(lián)物的庫(kù)存溶液應(yīng)分裝并儲(chǔ)存在-20°C，避免光線照射。

注意     不同細(xì)胞類型可能染色不同。應(yīng)相應(yīng)準(zhǔn)備Phalloidin偶聯(lián)工作溶液的濃度。

樣品實(shí)驗(yàn)協(xié)議

染色細(xì)胞：

進(jìn)行甲醛固定。在室溫下用含3.0-4.0%甲醛的PBS孵育細(xì)胞10-30分鐘。

注意     避免使用含甲醇的固定劑，因?yàn)榧状伎赡軙?huì)在固定過(guò)程中破壞肌動(dòng)蛋白。s選的固定劑是無(wú)甲醇的甲醛。

用PBS沖洗固定細(xì)胞2-3次。

可選：將0.1% Triton X-100加入PBS中，用于固定細(xì)胞3至5分鐘以增加通透性。用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。

將Phalloidin-iFluor™ 555偶聯(lián)工作溶液（100 μL/孔，96孔板）加入到固定細(xì)胞中，并在室溫下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行20至90分鐘的染色。

在將細(xì)胞板封蓋和在顯微鏡下使用TRITC濾光片組進(jìn)行成像之前，用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以去除多余的Phalloidin偶聯(lián)物。

圖：用4%甲醛固定的HeLa細(xì)胞的熒光圖像，然后分別用Phalloidin iFluor®555偶聯(lián)物（Cat#23119，紅色）和Nuclear Blue™DCS1（Cat#17548，藍(lán)色）染色。

鬼筆環(huán)肽-iFluor 555偶聯(lián)物文獻(xiàn)參考：

LSD1 deficiency in breast cancer cells promotes the formation of pre-metastatic niches

Authors: Yao, Yutong and Qian, Rui and Gao, Hanwei and Dai, Yonghao and Shi, Yueru and An, Peipei and Xin, Benkai and Liu, Ziyu and Zhang, Nan and Wan, Youzhong and others,

Journal: npj Precision Oncology (2024): 260

ROS-Responsive and Self-Catalytic Nanocarriers for a Combination of Chemotherapy and Reinforced Ferroptosis against Breast Cancer

Authors: Zhang, Beibei and Liu, Hao and Wang, Yifei and Zhang, Yong

Journal: ACS Biomaterials Science \& Engineering (2024)

LSD1 inhibits the invasion and migration of breast cancer through exosomes

Authors: Zhang, Nan and Chen, Zhongyu and Xin, Benkai and Shi, Yueru and Yao, Yutong and Yang, Jingtong and Wang, Xiaoyu and Hu, Xin

Journal: Scientific Reports (2024): 20817

Meis1 Targets Protein Tyrosine Phosphatase Receptor J in Fibroblast to Retard Chronic Kidney Disease Progression

Authors: Bai, Mi and Xu, Shuang and Jiang, Mingzhu and Guo, Yuxian and Hu, Dandan and He, Jia and Wang, Ting and Zhang, Yu and Guo, Yan and Zhang, Yue and others,

Journal: Advanced Science (2024): 2309754

Patterning in stratified epithelia depends on cell--cell adhesion

Authors: Mai, Yosuke and Kobayashi, Yasuaki and Kitahata, Hiroyuki and Seo, Takashi and Nohara, Takuma and Itamoto, Sota and Mai, Shoko and Kumamoto, Junichi and Nagayama, Masaharu and Nishie, Wataru and others,

Journal: Life Science Alliance (2024)