孕酮是一種內源性類固醇和孕激素性激素，參與人類和其他物種的月經周期、妊娠和胚胎發育。它屬于一類被稱為孕激素的類固醇激素，并且是體內主要的孕激素。孕酮還是合成其他內源性類固醇（包括性激素和皮質類固醇）的重要代謝中間產物，并作為神經類固醇在腦功能中發揮重要作用。EZElisa™孕酮（Pg）ELISA試劑盒采用競爭性抑制酶免疫測定技術。試劑盒中的微孔板已經預包被了抗兔抗體。將標準品或樣品加入到適當的微孔板孔中，加入特異性抗孕酮抗體和辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的孕酮。辣根過氧化物酶標記的孕酮與未標記的孕酮通過與抗體發生競爭性抑制反應。加入底物溶液到孔中，顏色的發展與樣品中孕酮的含量相反。停止顏色的發展，并測量顏色的強度。

艾美捷EZElisa孕酮ELISA試劑盒基本參數：

目錄號：D-AEK0002

規格：48T/96T

儲存：在4°C下儲存12個月，避光。

檢測范圍：0.5 ng/mL-30 ng/mL

靈敏度：0.2 ng/mL

精密度：內部精密度：變異系數（CV）＜15%。間接精密度：變異系數（CV）＜15%

回收率：回收率范圍為85%至115%，總體平均回收率為100%

特異性：EZElisa™孕酮（Pg）ELISA試劑盒對孕酮的檢測具有高靈敏度和優異的特異性。未觀察到孕酮與類似物之間的顯著交叉反應或干擾。

適用樣本：血清、血漿

供應材料和儲存條件：

Note: Std1: 0 ng/mL; Std2: 0.5 ng/mL; Std3: 2 ng/mL; Std4: 6 ng/mL; Std5: 15 ng/mL; Std6: 30 ng/mL.

EZElisa孕酮ELISA試劑盒試劑準備：

注意：使用前將所有試劑平衡至室溫。如果緩沖濃縮液中形成了晶體，請輕輕加熱，直到它們完-全溶解。

1×洗滌緩沖液：將洗滌緩沖液（20×）用去離子水稀釋1:20，得到1×洗滌緩沖液。儲存在4°C。樣品制備

1.血清：使用血清分離管，在室溫下凝固樣品30分鐘，然后以1,000 g的速度離心15分鐘。立即使用血清進行檢測，或將樣品分裝并儲存于-20°C。避免反復凍融循環。

2.血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑采集血漿。在采集后30分鐘內以1,000 g的速度離心15分鐘。立即進行檢測，或將樣品分裝并儲存于-20°C。避免反復凍融循環。注意：不要使用明顯溶血或脂質混濁的樣本。如果樣品在24小時內使用，可以儲存在2至8°C。避免反復凍融循環。在進行檢測之前，冷凍樣品應緩慢回溫至室溫，并輕輕混勻。

程序分析：

1. 從板框中取出多余的微孔板條，放回包含干燥劑包的鋁箔袋中，并重新密封。

2. 每個孔加入50 μL的孕酮標準品或樣品。建議將所有標準品和樣品都復制加入微孔板中。設置一個不加任何溶液的空白孔。

3. 向每個孔中加入50 μL的HRP偶聯的孕酮（不加入空白孔），然后按照相同的順序向每個孔中加入50 μL的孕酮檢測抗體。充分混勻后，使用提供的板蓋覆蓋孔板，然后在37°C下孵育1小時。

4. 倒掉每個孔中的液體并進行洗滌，總共重復三次洗滌過程。使用多通道移液器或自動微孔板洗滌器，將每個孔填滿1×洗滌緩沖液（250 μL），靜置10秒鐘，每個步驟完-全去除液體對于良好的性能至關重要。在最后一次洗滌后，倒轉孔板并在干凈的紙巾上輕拍，去除任何剩余的1×洗滌緩沖液。

5. 向每個孔中加入50 μL的底物A和50 μL的底物B，充分混勻并使用提供的板蓋覆蓋。在37°C下孵育15分鐘。將孔板放置在黑暗中，遠離氣流和其他溫度波動。

6. 向每個孔中加入50 μL的停止溶液。停止溶液應按照HRP底物的順序加入孔板中。孔中的顏色應從藍色變為黃色。如果孔中的顏色是綠色，或者顏色變化不均勻，請輕輕敲擊孔板以確保充分混勻。

7. 在30分鐘內使用設置為450 nm的微孔板讀數器測定每個孔的吸光度。

注：

1.不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合或替換。

2.為了避免交叉污染，在每個標準水平的添加之間和樣品之間更換移液管尖-端添加以及試劑添加之間。此外，每個試劑使用單獨的儲液器。

3.為了確保準確的結果，在培養步驟中需要適當粘附板蓋。

4.停止溶液具有一定的腐蝕性。操作時請采取防護措施

該試劑僅用于科學研究領域，不適用于臨床診斷或其他用途。