羥脯氨酸（（2S，4R）-4-羥脯氨酸，Hyp）是由脯氨酰-4-羥化酶形成的非蛋白源性氨基酸，其催化蛋白質合成后多肽脯氨酸殘基的翻譯后修飾。在動物體內發現羥脯氨酸幾乎全部由膠原蛋白組成，其中含有約12-14%的羥脯氨酸（纖維蛋白彈性蛋白也含有少量羥脯氨酸含量）。因此，組織水解物中的羥脯氨酸可直接測量膠原蛋白的含量。

膠原蛋白是哺乳動物和許多疾病中zui豐富的蛋白質被認為會影響膠原蛋白的轉化，包括腫瘤的侵襲和轉移轉移、類風濕性關節炎、心肺纖維化和肌營養不良。經典的Hyp測定方法是基于將Hyp氧化成吡咯中間體，然后與溶解在濃高氯酸中的埃利希試劑反應（HClO4）。高氯酸是一種有毒和高活性的有害物質，需要特殊處理和廢物處理協議。

艾美捷 BioVision羥脯氨酸檢測試劑盒（不含高氯酸鹽）使用專有的酸性顯影液較精確測量Hyp不使用有害高氯酸鹽的組織和蛋白質/肽酶水解物。這是一個快速方便的協議，產生了顏色鮮艷的發色團，吸收峰為560nm。該檢測法可檢測到至少0.05µg羥脯氨酸，每孔含0.05µg羥脯氨酸一個96孔的格式，并產生比色結果，幾乎是相同的經典高氯酸為基礎的方法。

艾美捷 BioVision羥脯氨酸檢測試劑盒組分：

氧化緩沖液10毫升WM K226-100-1

氯胺T濃縮液600µl紅色K226-100-2

顯影液5毫升NM K226-100-3

DMAB濃縮液（DMSO）5 ml琥珀色K226-100-4

羥脯氨酸標準品（1 mg/ml）100µl黃色K226-100-5

微孔板密封膜1膜─ K226-100-6

該羥脯氨酸檢測試劑盒相關試劑和設備：

1、基于微板的多壁分光光度計

2、用平底清理96孔板

3、10N氫氧化鈉（NaOH）和10N鹽酸（HCl）

4、水解用：聚丙烯小瓶（BV類別號M1352）和螺帽（BV類別號M1353）

圖：（a）羥脯氨酸標準曲線。（b） 羥脯氨酸標準曲線吸光度值之間的相關性經典的基于高氯酸的分析試劑盒（Cat#K555）和無高氯酸鹽分析。這兩種檢測方法顯示出良好的相關性（R）2.> 0.999). 一個平淡的Altman圖表明兩次分析之間高度一致，平均差異僅為3.06±各方法產生的吸光度值之間的0.33%。（c） 大鼠組織中總羥脯氨酸含量的估算。老鼠腿部肌肉、脾臟、心臟和肺樣品用dH2O均質，在120°C下用10N NaOH水解1小時，并用10N鹽酸中和。對于每個樣品，測定10μlzui終中和水解物。羥脯氨酸水平（按μg羥脯氨酸/mg濕組織）的含量：肌肉為1.71±0.09μg/mg，脾臟為0.47±0.07μg/mg，脾臟為0.56±0.10μg/mg心臟為1.56±0.17μg/mg，肺為1.56±0.17μg/mg。數據為3-4個重復的平均值±SEM，根據試劑盒方案進行分析。