CUT&RUN(Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease)在細胞內利用抗體靶向定位目標蛋白, 再由pA/G-微球菌核酸酶(Micrococcal nucleasel, MNase)對目標蛋白兩端的DNA進行切割,從而將目標蛋白質-DNA復合物釋放到細胞外。
作為ChIP的高效替代方案, CUT&RUN技術在蛋白質-DNA研究中將會被越來越廣泛地使用。以下為CUT&RUN與Chip-seq對比圖:
圖:分別對K-562細胞的H3K4me3和H3K27me3所結合的DNA進行測序,用于ChIP的細胞數量為2000萬,用于 CUT&RUN的細胞數為50萬。對測序結果進行分析,CUT&RUN有著卓丨越的靈敏度和信噪比,測序深度減少了10倍以上,細胞的需求減少了40倍。
艾美捷 EpiGentek EpiNext CUT&RUN快速套件,以優惠價格從低輸入提供無超聲破碎,以可靠地識別真正的目標蛋白質富集區域并實現高分辨率定位。可滿足用戶快速富集蛋白質結合的DNA并繪制全基因組蛋白質/DNA相互作用的圖譜的需求。
EpiNext CUT&RUN快速套件包含執行測試所需的所有必要試劑從哺乳動物細胞或分離的細胞核/染色質開始成功切割和運行。在反應中,,細胞核是從細胞中分離出來的。靶蛋白DNA復合物與芯片級結合/捕獲感興趣的抗體。使用*的核酸裂解酶混合物,染色質片段化,目標蛋白質/DNA復合物兩端的DNA序列劈開/移除。同時,目標蛋白占據的DNA序列不受影響。然后純化和洗脫靶蛋白結合的DNA。富集的DNA可用于用各種方法分析蛋白質與DNA的相互作用,特別是下一代測序。試劑盒中包括陽性對照抗體(抗H3K9me3),陰性對照非免疫IgG,和對照染色質,可用于證明試劑盒的有效性和現場性能PCR/生物分析儀步驟。
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