背景介紹：

細胞增殖和細胞死亡間平衡的維持對多種細胞有機的發育與生命的維持至關重要，其失衡將導致各 種疾病的發生.如：人類平均每天有 6×10（10）個新細胞生成，同時又接近同等數量的成熟細胞被機體清除.在細胞增殖及細胞凋亡間存在一種配對關系，因此區分活細胞和死細胞對研究生長條件的控制和 細胞死亡過程都是十分重要的。

工作原理：

活/死細胞雙染色試劑盒（綠/紅），提供了一種方便的測定方法，以評估細胞的活力，它基于使用兩種探針同時測定活細胞和死細胞的方法，這些探針測量*的細胞健康參數：質膜完整性和細胞內酯酶活性。該試劑盒利用可滲透細胞的綠色熒光染料 LiveDye（Ex / Em = 488/530 nm）染色活細胞，并使用不可滲透細胞的紅色熒光染料 NucleiDye（Ex / Em = 535/617）用來染死細胞。

活/死細胞雙染色試劑盒#AMJ-KT0005：

類型 細胞分析

檢測方法 熒光顯微鏡，流式細胞術；

活細胞綠色熒光染料 LiveDye（Ex / Em = 488/530 nm）死細胞紅色熒光染料 NucleiDye（Ex / Em = 535/617）

運輸 冰袋運輸

保存 請參閱說明書中各個組分的存儲條件。

自發貨之日起，在推薦溫度下至少穩定 12 個月。

其它 默認使用 24 孔板進行實驗

* 注意事項

1）為了安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）NucleiDye 是一個潛在的誘變因子，使用本試劑時應采取適當的防護措施

3）LiveDye 需要在干燥低溫避光條件下儲存，儲存溫度為-20℃。

需用戶自行準備：

離心機

移液器及吸頭

熒光顯微鏡或流式細胞儀

24 孔板（細胞培養用）

磷酸鹽緩沖液 (PBS)

活/死細胞雙染色試劑盒（綠/紅）特點：

1.針對哺乳動物細胞染色進行優化

2.可用于使用流式細胞術或熒光顯微鏡，快速定量細胞活力

使用方法：

*[Note] 本實驗中選擇的細胞為 HeLa 細胞。由于不同類型細胞的*染色條件不同，LiveDye和 NucleiDye 的*染色濃度會有所不同。

一．試劑準備：

A.活細胞-綠色染料（LiveDye）：冰上避光放置。

B.死細胞-紅色染料（NucleiDye）：冰上避光放置。

C.實驗緩沖液 (10×) [Assay Buffer(10×)]：用 ddH20 稀釋 10x 實驗緩沖液，至 1x 實驗緩沖液（工作液）。使用前預熱到 37C。

D.染色工作液：每 1 ml 的實驗緩沖液（1X）中，加入 1ul 活細胞-綠色染料（LiveDye）和 1ul 死細胞-紅色染料（NucleiDye），混合均勻（適用于2個樣品孔，每孔0.5ml）。如有大量樣品，請成比例的擴大染色工作液配置。

二．

（一）熒光顯微鏡：

1.用預期的方法處理細胞，在不含誘導劑條件下孵育細胞建立陰性對照組；

2.對于貼壁細胞，在 24 孔板的蓋玻片上種植和培育細胞，在 CO2 細胞培養箱中 37°C 培養至少 24 小時。先用細胞刮刀或者胰酶-EDTA 消化細胞，之后離心收集細胞（1000 rpm，3 min）。

對于懸浮細胞，直接離心(4℃, 300g, 5 min）收集細胞。

3.用 PBS 洗滌細胞兩次，移除液體。

4.在 24 孔板中，每個孔加入 0.5ml 染色工作液來，37℃避光孵育 15-30 min。

5.用 PBS 洗滌細胞兩次。

6.將蓋玻片覆蓋到載玻片上，盡快使用適當的濾光片通過熒光顯微鏡分析細胞。

*[Note] ：為了獲得*效果，可以使用抗熒光淬滅劑對其進行觀察。

（二）流式細胞分析：

1.用預期的方法處理細胞。

*[Note] ：對于所有的處理和未處理的細胞樣本，建議把未染色的對照組細胞懸浮在實驗緩沖液（不含有 LiveDye 和 NucleiDye），用于流式細胞分析；

2.對于非貼壁細胞，收集 1-5 ×105 個細胞離心 (4℃, 300g, 5 min)，用預冷的 PBS 洗滌

2 次，棄去 PBS。對于貼壁細胞，先用胰蛋白酶（不含 EDTA）消化細胞，然后離心去上清。

3.用 500ul 染色工作液來懸浮細胞。

4.避光孵育 15-30 min。

5.使用流式細胞儀進行相應檢測與分析。

相關研究工具：

貨號 名稱 規格

AMJ-AB1001 β-actin 單克隆抗體(AJ01) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1002 GAPDH 單克隆抗體(1B4) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1003 β-Tubulin 單克隆抗體(2B5) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1004 植物Actin 單克隆抗體(2G2) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1005 Flag 標簽單克隆抗體(2B9) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1006 HA 標簽單克隆抗體(3F5) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1007 His 標簽單克隆抗體(4C2) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-CH0001 預染蛋白分子量 Marker（10-180 kDa） 100ul, 250ul, 250ul*10

AMJ-CH0002 蛋白酶抑制劑套裝（100X） 1ml, 1ml*2, 1ml*5

AMJ-KT0002 WB 超敏ECL 底物試劑盒 50ml, 200ml, 1L

AMJ-KT0006 核蛋白與胞漿蛋白提取試劑盒 50T, 200T

AMJ-KT0007 總蛋白提取試劑盒 50T, 200T

AMJ-KT0008 BCA 蛋白質定量試劑盒（兼容SDS） 500T, 2000T, 5000T

AMJ-KT0009 Bradford 蛋白質定量試劑盒（兼容DTT） 500T, 2000T, 5000T