構建表達載體的時候 ，我們要如何選擇合適自己實驗需要的載體呢？載體可分為病毒載體和非病毒載體，病毒載體又分為慢病毒載體、腺病毒載體和腺相關病毒載體等。下面來說說病毒載體中的慢病毒載體。

一、慢病毒

逆轉錄病毒（Retrovirus）：是一種RNA病毒，在復制時需在逆轉錄酶的作用下首先將RNA轉變為cDNA， 再在DNA復制、轉錄、翻譯等蛋白酶作用下擴增。主要包括RNA腫瘤病毒、慢病毒及泡沫病毒等三種亞科。

慢病毒（Lentivirus）：屬于逆轉錄病毒科，名稱源自該種病毒長達數年的潛伏期。

*經典的慢病毒是由HIV病毒改造而來，而且HIV-1/HIV-2系統也得到了廣泛的應用，除了HIV病毒系統以外，后續還有猿類免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus, SIV）載體系統、貓免疫缺陷病毒（felines immunodeficiency virus, FIV）載體系統、綿羊梅迪-維斯納病毒（MMV）載體系統和馬傳染性貧血(EIA）載體系統等。

慢病毒的優勢：

1.慢病毒攜帶的基因組可整合到宿主基因組，使宿主細胞長時間穩定表達外源基因；

2.可感染分裂和非分裂細胞；

3.低免疫原性，直接注射活體組織不易造成免疫反應，適用于動物實驗；

4.可以更換特異性啟動子；

5.野生型的HIV大小約為9.8 kb，插入片段可長達5-6 kb；

二、慢病毒載體

慢病毒載體（Lentivirus）是一類改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒載體，是逆轉錄病毒的一種，基因組是RNA，其毒性基因已經被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。可利用逆轉錄酶將外源基因整合到基因組中實現穩定表達，具有感染分裂期與非分裂期細胞的特性。

慢病毒載體的優勢：

（1）表達時間長：慢病毒可將外源基因整合到宿主細胞基因組上，實現基因長時間穩定的表達，不隨細胞分裂傳代而丟失，是細胞實驗的推薦，常用于構建穩轉株。

（2）安全性高：未發現致病性，慢病毒載體改造T細胞用于CAR-T細胞治療。

（3）免疫原性低：直接注射活體組織不易造成免疫反應，適用于動物實驗。

三、應用

基因治療；轉基因動物；基因敲除；藥物研究；慢病毒載體能夠有效地感染培養的腫瘤細胞、肝細胞、心肌細胞、神經元、內皮細胞、干細胞等多種類型原代細胞和大部分細胞系；慢病毒的感染具有整合特性，能夠將外源基因有效地整合到宿主染色體上，因而可以達到持久性表達，從而構建穩轉細胞株，用于基因的細胞功能研究；快速建立生產目的蛋白的細胞系，非常有前途的真核表達方法。

慢病毒載體（ORF、啟動子、shRNA）：ORF表達克隆，shRNA克隆，miRNA前體表達克隆，miRNA inhibitor克隆，啟動子報告克隆，CRISPR-Cas9相關克隆均可構建。

Cas9 核酸酶純化 Lentifect 慢病毒顆粒：Cas9核酸酶克隆表達按照人類密碼子優化過的Cas9核酸酶基因。Cas9切口酶克隆表達一個Cas9 D10A 切口酶基因。該切口酶是一個Cas9突變體，第10位氨基酸從野生型的天冬氨酸突變成了丙氨酸。

細胞永生化試劑：原代細胞經過一定數量的增殖，和一定次數的分裂后達到復制衰老的狀態，從而限制了衰老或受損細胞的增殖。GeneCopoeia提供細胞永生化試劑，利用重組慢病毒攜帶基因，如simian virus 40 (SV40)大T抗原和人端粒酶逆轉錄酶蛋白(hTERT)誘導永生化，可顯著延長原代細胞的壽命。

慢病毒包裝試劑盒：Lenti-Pac™ HIV 表達包裝系統包括優化的慢病毒包裝質粒，eGFP陽性對照質粒，EndoFectin™轉染試劑，增加病毒產量的TiterBoost™滴度增強劑。該系統與GeneCopoeia的ORF、shRNA、miRNA及Promoter克隆配套使用保證更高滴度和更高表達水平。

慢病毒濃縮試劑盒：Lenti-Pac™ 慢病毒濃縮試劑是GeneCopoeia為用戶設計的用于快速、簡便濃縮慢病毒顆粒的慢病毒濃縮試劑。實驗操作時只需將濃縮試劑與需濃縮的慢病毒上清液混合，經短暫孵育，普通離心機離心即可。

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