鈣離子濃度研究領(lǐng)域中常使用鈣離子熒光探針與鈣離子的特異性結(jié)合來觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度水平的變化，此類探針未結(jié)合Ca2+前幾乎無熒光，結(jié)合Ca2+后，熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，所顯示光譜可被熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、熒光光譜法以及熒光酶標(biāo)儀等多種方法檢測(cè)。

常用的Ca2+熒光探針根據(jù)波長(zhǎng)的不同，分為兩大類：可見光激發(fā)Ca2+熒光探針和紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針

*受歡迎的可見光激發(fā)Ca2+熒光探針：

1）Fluo-3 Fluo-3是*常用的可見光激發(fā)Ca2+熒光探針，較高的Ca2+結(jié)合力可捕捉細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)的動(dòng)力學(xué)變化，使用于多種流式細(xì)胞術(shù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，如籠鎖Ca2+螯合劑光活化、第二信使、神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)研究以及細(xì)胞水平的藥物篩選等。

2）Fluo-4 Fluo-4是鈣指示劑Fluo-3的升級(jí)版本，主要變化為后者分子上的兩個(gè)氯原子被Fluo-4上的氟所取代，該結(jié)構(gòu)上的微小變化使Fluo-4,AM加載更快，在相同濃度下檢測(cè)信號(hào)更強(qiáng)。

3）Rhod-2 Rhod-2是另一種可見光激發(fā)的高親和力Ca2+指示劑，與其他可見光激發(fā)熒光探針如Fluo-3/4相比，Rhod-2具有長(zhǎng)波長(zhǎng)，更適用于檢測(cè)具有較高自熒光現(xiàn)象的細(xì)胞和組織內(nèi)鈣離子水平以及檢測(cè)由光感受器和籠鎖Ca2+螯合劑光激活導(dǎo)致的鈣離子釋放。

1，鈣離子熒光探針Rhod-2，貨號(hào)：21060

2，CalbryteTM 590 乙酰氧甲酯，貨號(hào)：20700

3，CalbryteTM 630 乙酰氧甲酯，貨號(hào)：20720

Fura-2和Indo-1均屬紫外激發(fā)Ca2+熒光指示劑，也是目前*常用的鈣比率測(cè)量熒光探針。Fura-2是雙激發(fā)波長(zhǎng)熒光染料，Indo-1是雙發(fā)射波長(zhǎng)熒光染料，均采用比率測(cè)量方法，該方法可以消除不同細(xì)胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，熒光探針的滲漏，細(xì)胞厚度差異等一些誤差因素。Fura-2特別適合于數(shù)字成像顯微鏡，使用該設(shè)備可更方便的調(diào)整激發(fā)波長(zhǎng)，使探針結(jié)合鈣離子后在300-400nm的激發(fā)波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描Fura-2的吸收偏移，在510nm處檢測(cè)發(fā)射波長(zhǎng)。

相比之下，Indo-1更傾向于流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，使用該設(shè)備可實(shí)現(xiàn)在氬離子激光器的351-364光譜范圍內(nèi)單一波長(zhǎng)的激發(fā)，在400nm和480nm的波長(zhǎng)處分別檢測(cè)結(jié)合鈣離子和未結(jié)合鈣離子的熒光信號(hào)，通過二者的比值確定鈣離子的濃度。Fura-2,AM和Indo-1,AM分別是Fura-2和Indo-1的乙酰氧甲酯（AM）衍生物，具有活細(xì)膜滲透性。

其他鈣離子熒光探針：

腔腸素鈣離子熒光探針和鈣離子熒光探針Cal-500 與常規(guī)的熒光鈣離子指示劑相比，其主要具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn): a.能檢測(cè)較大范圍的鈣濃度 – 從0.1 μM至 >100μM； b.樣品無自體熒光，背景熒光低于使用熒光鈣離子指示劑；雖然信號(hào)比使用熒光鈣離子指示劑弱，但是通過成像儀器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的靈敏度。 c.水母發(fā)光蛋白復(fù)合體能夠穩(wěn)定維持在細(xì)胞內(nèi)，使其能夠進(jìn)行數(shù)小時(shí)至數(shù)天的鈣離子監(jiān)測(cè) 與現(xiàn)有的鈣指示劑（如Fluo-3 AM，F(xiàn)luo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供*強(qiáng)大的均勻熒光測(cè)定工具，用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣動(dòng)員。這些鈣敏感染料明顯更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了細(xì)胞內(nèi)保留和負(fù)載效率。