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該方法用于大多數蛋白質的定量是比較精確的，但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0.2%影響測定結果，如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于細胞骨架的檢驗。
將100mg考馬斯亮藍G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL 85%的磷酸，然后，用蒸餾水補充至1000mL，此染液放4℃至少6個月保持穩定。
樣本準備
盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標準品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標準。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標準蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之間繪制標準曲線。
將待測樣本溶于100~1緩沖溶液中，該緩沖溶液應與制作標準曲線的緩沖溶液相同(最好用PBS)。
按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液，如出現沉淀，過濾除去。
每個樣本加5mL稀釋的染料結合溶液，作用5～30min。染液與蛋白質結合后，將由紅色變為藍色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應不得超過30min。
根據標準曲線計算待測樣本的濃度。
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