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二手LC液相色譜儀如何改善分離的選擇性?

閱讀:1214        發(fā)布時(shí)間:2019-3-22

二手LC液相色譜儀分析中,通過向流動(dòng)相中加入改性劑調(diào)節(jié)pH值和調(diào)節(jié)流動(dòng)相的溶劑極性強(qiáng)度,可以改善分離的選擇性。

一、向二手LC液相色譜儀流動(dòng)相中加入改性劑調(diào)節(jié)pH值
(1)抑制溶質(zhì)離子化:
反相液相色譜中,常向含水流動(dòng)相中加入酸、堿或緩沖溶液,使流動(dòng)相的pH值控制在一定數(shù)值,抑制溶質(zhì)離子化,減少譜帶拖尾,改善峰形,以提高分離選擇性。例如在分析有機(jī)弱酸時(shí),常向甲醇-水流動(dòng)相中加入1%甲酸(或乙酸、磷酸、硫酸),抑制溶質(zhì)離子化,以獲得對稱的色譜峰。對于弱堿性樣品向流動(dòng)相中加入1%三乙胺,也可以達(dá)到同樣的效果。
(2)調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度:
反相液相色譜中,當(dāng)被分析物質(zhì)是易離解的有機(jī)物時(shí),隨流動(dòng)相pH值的增加,鍵合相表面殘存的硅羥基和堿的陰離子的親和能力增強(qiáng),會(huì)引起峰形拖尾并干擾分離,可在流動(dòng)性中加入0.1%~1%的乙酸鹽、硫酸鹽或硼酸鹽。因?yàn)辂}效應(yīng)會(huì)減弱殘存硅羥基的干擾作用,可抑制峰形拖尾并改善分離效果。但經(jīng)常使用磷酸鹽或鹵化物,會(huì)造成硅烷化固定相的降解。
通常調(diào)節(jié)pH值對中性化合物的影響不大,但對帶有離子化基團(tuán)的化合物(如氨基、羧基和羥基等)保留因子影響可達(dá)10~30倍,分離度變化明顯。但如果使用的流動(dòng)相中加入了緩沖鹽,要在使用前用純水過渡。如果緩沖鹽或離子對試劑濃度較低,需要較長時(shí)間平衡。  


二、調(diào)節(jié)二手LC液相色譜儀流動(dòng)相的溶劑極性強(qiáng)度
1、由強(qiáng)到弱:
一般先用90%的乙腈或甲醇-水或緩沖溶液進(jìn)行試驗(yàn),可很快得到分離結(jié)果,然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
2、三倍規(guī)則:
每減少10%的有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的量,保留因子增加約3倍,此為三倍規(guī)則。調(diào)整時(shí)注意觀察各個(gè)峰的分離情況。
3、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):
當(dāng)分離達(dá)到一定程度時(shí),應(yīng)將有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)10%的改變量調(diào)整為5%,并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率,直至各組分的分離情況不再改變。

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