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移液器的檢測和校準指南
閱讀：682 發布時間：2018-3-5
一、實驗室簡單檢測
(一) 氣密性檢測
移液器吸滿液體后，手持垂直放置15s，檢查吸嘴的尖頭有無液滴，如有，則說明漏氣。
(二) 準確性檢測
1) 量程小于1μl，建議使用分光光度法檢測。將移液器調至目標體積，然后移取染料溶液，加入一定體積的蒸餾水中，測定溶液的稀釋度(334nm或340nm)，重復幾次移液操作，計算移液器的度。
2) 量程大于1μl，可以用稱重法檢測。通過對水的稱重，轉換成體積(體積=質量/密度)，鑒別移液器的準確性。由于水的密度是隨著溫度變化而變化，且稱量天平本身度不符合檢測要求，檢測又大多在一個開放式空間內操作，偏差在所難免。因而，此種稱量法只能現場粗略地判斷移液器的準確性，進一步的校準必須在專業的實驗室操作進行。
注意：稱重法實驗室*條件是高度靈敏的分析天平(定期校準)、雙蒸水和稱量容器。水、移液器和吸嘴必須具有相同的溫度(20℃時水的密度為0.09982)。
二、專業校準
移液器的工作量大，長期使用，將會使彈簧彈力發生變形，加之本身是塑料，不耐磨擦，就會產生誤差。為了保證移液器傳遞液體量的準確性，必須對移液器進行定期校準。為了更好地發揮該類計量儀器的作用，對新購進的儀器要進行校準才能使用;對正在使用的計量儀器，由于長期使用會造成其示值于度量對象的誤差，這種誤差若不進行控制，及時校正，必定會影響科研工作。因此，對使用的移液器要定期檢定、校正，并建立檔案，只有這樣才能使其在日常工作中更好的發揮作用。
目前，在許多實驗室條件下進行的常規檢測并不能*取代專業的校準工作，因為校準對于外部環境、工作條件及使用的精密儀器具有較高的技術要求，而這些條件往往是大多數實驗室無法提供的。現在一些大型的移液器制造商均采用統一的移液器標準操作規范，利用專業軟件校正系統，通過計算機對分析天平進行在線控制，測量、數據采集、計算、結果評價等環節由軟件控制完成，所有人為操作都被計算機記錄隨報告打印出來，采用電腦對數據進行評估認證，*排除了人為操縱校準結果的可能性，并制定當地代理商提供專業的校準和維修服務。下面以Eppendorf公司為例，介紹其專業校準操作。
(一) 校準的基本操作條件
操作室：獨立房間，顯示溫度和濕度狀態。
溫度控制：15~30℃(±0.5℃)
濕度控制：60%~90%
工作臺面：防震、防塵、遠離熱源、無陽光直射。
天平：0.000 01g精密分析天平(小數點后5位)，每年需由廠家進行校準。
防蒸發裝置：Eppendorf提供的濕度阱，防止稱量液體的揮發。
測試介質：雙蒸水，每4h更換一次，批次更換周期不大于2周。
(二) 操作過程
1) 同溫化處理：校正前，所有移液器及校正介質(如工作臺、天平、雙蒸水等)置于相同操作間至少4h，以確保它們具有相同的溫度。
2) 內外部清洗。
3) 潤滑活塞。
4) 校準：采用三點校準法，即根據移液器量程范圍，選取zui低量程、中間值和zui高量程三點分別測試10次，各個測試點取其平均值，計算其準確度(inaccuracy)和度(imprecision)，評價標準符合DIN 12650要求。
5) 校準報告：可根據客戶需求提供給算計打印的標準報告或PICASO校正報告，符合ISO、DIN或ASTM相關標準。
三、影響準確性的因素
1) 操作錯誤：包括30℃手持式移液器吸液;與吸嘴不匹配，較易造成脫落;殘留的試劑倒流，污染活塞和密封圈;快速吸液排液，導致部分液體殘留在吸頭上等都會影響準確性。
2) 移液器損壞：包括移液器的頭部被刮擦，斷裂受損;活塞受污染;彈簧受腐蝕等。
3) 操作條件的影響：包括未作調整吸取與水不同密度的液體;樣品和移液器的差別太大等。
(一) 氣密性檢測
移液器吸滿液體后，手持垂直放置15s，檢查吸嘴的尖頭有無液滴，如有，則說明漏氣。
(二) 準確性檢測
1) 量程小于1μl，建議使用分光光度法檢測。將移液器調至目標體積，然后移取染料溶液，加入一定體積的蒸餾水中，測定溶液的稀釋度(334nm或340nm)，重復幾次移液操作，計算移液器的度。
2) 量程大于1μl，可以用稱重法檢測。通過對水的稱重，轉換成體積(體積=質量/密度)，鑒別移液器的準確性。由于水的密度是隨著溫度變化而變化，且稱量天平本身度不符合檢測要求，檢測又大多在一個開放式空間內操作，偏差在所難免。因而，此種稱量法只能現場粗略地判斷移液器的準確性，進一步的校準必須在專業的實驗室操作進行。
注意：稱重法實驗室*條件是高度靈敏的分析天平(定期校準)、雙蒸水和稱量容器。水、移液器和吸嘴必須具有相同的溫度(20℃時水的密度為0.09982)。
二、專業校準
移液器的工作量大，長期使用，將會使彈簧彈力發生變形，加之本身是塑料，不耐磨擦，就會產生誤差。為了保證移液器傳遞液體量的準確性，必須對移液器進行定期校準。為了更好地發揮該類計量儀器的作用，對新購進的儀器要進行校準才能使用;對正在使用的計量儀器，由于長期使用會造成其示值于度量對象的誤差，這種誤差若不進行控制，及時校正，必定會影響科研工作。因此，對使用的移液器要定期檢定、校正，并建立檔案，只有這樣才能使其在日常工作中更好的發揮作用。
目前，在許多實驗室條件下進行的常規檢測并不能*取代專業的校準工作，因為校準對于外部環境、工作條件及使用的精密儀器具有較高的技術要求，而這些條件往往是大多數實驗室無法提供的。現在一些大型的移液器制造商均采用統一的移液器標準操作規范，利用專業軟件校正系統，通過計算機對分析天平進行在線控制，測量、數據采集、計算、結果評價等環節由軟件控制完成，所有人為操作都被計算機記錄隨報告打印出來，采用電腦對數據進行評估認證，*排除了人為操縱校準結果的可能性，并制定當地代理商提供專業的校準和維修服務。下面以Eppendorf公司為例，介紹其專業校準操作。
(一) 校準的基本操作條件
操作室：獨立房間，顯示溫度和濕度狀態。
溫度控制：15~30℃(±0.5℃)
濕度控制：60%~90%
工作臺面：防震、防塵、遠離熱源、無陽光直射。
天平：0.000 01g精密分析天平(小數點后5位)，每年需由廠家進行校準。
防蒸發裝置：Eppendorf提供的濕度阱，防止稱量液體的揮發。
測試介質：雙蒸水，每4h更換一次，批次更換周期不大于2周。
(二) 操作過程
1) 同溫化處理：校正前，所有移液器及校正介質(如工作臺、天平、雙蒸水等)置于相同操作間至少4h，以確保它們具有相同的溫度。
2) 內外部清洗。
3) 潤滑活塞。
4) 校準：采用三點校準法，即根據移液器量程范圍，選取zui低量程、中間值和zui高量程三點分別測試10次，各個測試點取其平均值，計算其準確度(inaccuracy)和度(imprecision)，評價標準符合DIN 12650要求。
5) 校準報告：可根據客戶需求提供給算計打印的標準報告或PICASO校正報告，符合ISO、DIN或ASTM相關標準。
三、影響準確性的因素
1) 操作錯誤：包括30℃手持式移液器吸液;與吸嘴不匹配，較易造成脫落;殘留的試劑倒流，污染活塞和密封圈;快速吸液排液，導致部分液體殘留在吸頭上等都會影響準確性。
2) 移液器損壞：包括移液器的頭部被刮擦，斷裂受損;活塞受污染;彈簧受腐蝕等。
3) 操作條件的影響：包括未作調整吸取與水不同密度的液體;樣品和移液器的差別太大等。