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熒光分光光度計的原理
2018-4-28 閱讀(703)
熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定，不但可以做一般的定量分析，而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化，從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發波長掃描范圍一般是190~650nm，發射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。
熒光分光光度計的原理：
由高壓汞燈或氙燈發出的紫外光和藍紫光經濾光片照射到樣品池中，激發樣品中的熒光物質發出熒光，熒光經過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數字的形式顯示出來。
物質熒光的產生是由在通常狀況下處于基態的物質分子吸收激發光后變為激發態，這些處于激發態的分子是不穩定的，在返回基態的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產生熒光。
不同物質由于分子結構的不同，其激發態能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現為各種物質都有其特征熒光激發和發射光譜，因此可以用熒光激發和發射光譜的不同來定性地進行物質的鑒定。
在溶液中，當熒光物質的濃度較低時，其熒光強度與該物質的濃度通常有良好的正比關系，即IF=KC，利用這種關系可以進行熒光物質的定量分析，與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標準曲線法進行。
