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THP-1 人單核細胞白血病細胞/STR鑒定/鏡像綺點(iCell)介紹
該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用,無表面和胞質免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導單核細胞分化。
細胞特性
1) 來源:急性單核細胞白血病,單核細胞
2) 形態:單核細胞,懸浮
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:
(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;
(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
(3)收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。
THP-1 人單核細胞白血病細胞/STR鑒定/鏡像綺點(iCell)
細胞用途:僅供科研使用。
細胞接收后的處理:
1) 收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3) 貼壁細胞:將T25瓶中的細胞培養基離心后,去上清,添加6ml*培養基,加入新的T25瓶中繼續培養。
懸浮細胞:2-3小時
4) 如果細胞長滿80%請及時進行細胞傳代.
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640培養基;胎牛血清,10%;0.05 mM β-巰基乙醇(invitrogen 21985) 0.05mM;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:*培養液95%,DMSO 5%(使用該凍存液后,按照我庫的經驗復蘇存活率約50%,復蘇后需要額外培養7-10天才能恢復生長)
4) a) 該細胞為懸浮細胞,根據培養經驗以及客戶的反饋,傳代時使用【半換液法】對細胞狀態較為有利,因此我庫建議您使用【半換液法】進行傳代。同時,您在收到細胞后,請不要通過離心的方式收集細胞,可以直接向培養瓶中添加等體積的新鮮培養液,然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養瓶中繼續培養即可。
b) 細胞對血清質量較為敏感,我庫建議您使用進口*優質血清進行培養。
c) 該細胞的培養液中需添加β-巰基乙醇(細胞培養級別,可參考細胞說明書中的品牌、貨號),若不添加,可能會對細胞狀態造成影響。
d) 該細胞對細胞密度較為敏感,培養、傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍(具體請參考細胞說明書)。
e) 該細胞凍存后復蘇率較低,凍存時請酌情提高細胞量
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 參考傳代周期:傳代時控制細胞密度在20萬-40萬活細胞 / mL,并在細胞生長至80萬-100萬 cell / mL時進行傳代
3) 參考傳代比例:傳代時控制細胞密度在20萬-40萬活細胞 / mL,并在細胞生長至80萬-100萬 cell / mL時進行傳代。
4) 參考換液頻率:傳代時換液
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3) 細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例;
1,細胞凍存時,取上清,可使用血球計數板計數。
2,4min ,1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為5%,該細胞凍存后復蘇率較低,凍存時請酌情提高細胞量.每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少4個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
鏡像綺點(上海)細胞技術有限公司主要產品和服務介紹:
一、原代細胞服務:
各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等
原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務
二、細胞系服務:
細胞株/系培養、增殖、凍存和相關說明書
細胞系培養過程的技術指導
細胞系培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等
三、iPS細胞服務:
iPS細胞基礎培養(有滋養層or無滋養層)
iPS細胞增殖及冷凍保存
iPS基礎培養技術實習
新藥及實驗儀器上市前評估
四、其他技術外包服務、客戶定制服務等
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