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A-704 人腎癌細胞/STR鑒定/鏡像綺點（iCell）介紹
A-704細胞系來源于78歲男性腎癌患者，D.J. Giard建系，該細胞適宜做轉染宿主。細胞在免疫缺陷小鼠上不能形成移植瘤，但是可以在半固體培養基中形成克隆。
細胞特性
1） 來源：腎癌
2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：
（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。
A-704 人腎癌細胞/STR鑒定/鏡像綺點（iCell）用途：僅供科研使用。
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的*培養基。
4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
細胞培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備McCOY's 5A培養基；北美胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續傳代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。
細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1mlyi酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和技術服務：
一、原代細胞服務
各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等；
原代細胞相關技術服務和整體實驗外包服務；
二、細胞株/系服務
細胞株/系培養、增殖、凍存和相關說明書；
細胞系培養過程的技術指導；
細胞系培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等；
三、iPS細胞
iPS細胞基礎培養（有滋養層or無滋養層在）；
iPS細胞增殖及冷凍保存；
iPS基礎培養技術實習；
新藥及實驗儀器上市前評估；
四、技術外包服務：各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務等
五、其他：根據客戶需要定制服務等
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