以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
商品介紹:
Biotin-VAD-FMK是可滲透細胞的,不可逆的,由生物素標(biāo)記的胱天蛋白酶抑制劑,用于鑒定細胞裂解物中的半胱天冬酶活性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1135688-15-1 純度:98.0% 分子量:672.81 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Very low density lipoprotein receptor (VLDLR) ELISA Kit 人極低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒
guineapigLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforANG-IIELISAKit大鼠血管緊張素Ⅱ規(guī)格:48T/96T
血液脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量檢測試劑盒20次
PorcineDexamethasone,DexELISAKit豬地塞米松(Dex)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-4 ELISA Kit
大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA檢測試劑盒RatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKIT 96T/48T
人U1小核核糖核蛋白A(SPA)免疫試劑盒 Human SPA ELISA kit
英文名稱MouseGhrelinELISAKit小鼠生長激素釋放肽(Ghrelin)規(guī)格:96T/48T
TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP直接檢測試劑盒(含AP一抗)10次
Rabbitleoopichormone,LHELISA試劑盒兔子促黃體激素(LH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬組織因子(TF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒
Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H規(guī)格:48T/96T
溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾)1毫升
Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit豬髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
胱天蛋白酶抑制劑(Biotin-VAD-FMK)Semaphorin 5B 英文名稱: 跨膜蛋白SEMA5B抗體 0.2ml
Dengue virus envelope glycoprotein E 英文名稱: 登革熱病毒包膜糖蛋白E抗體 0.2ml
α-連環(huán)蛋白抗體(α鏈接素) Anti-α-Catenin/α-cats 0.1ml
Anti-Tyrosinase/FITC 熒光素標(biāo)記酪氨酸酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-HP1 gamma (Ser93) 磷酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體 規(guī)格 0.1ml
ABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2mg