以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
商品介紹:
Nestoron(ST1435;Elcometrine)是19-norprogesterone衍生物,是孕酮受體高親和力激動劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:7759-35-5 別名:Elcometrine;Nestorone;ST-1435 分子量:370.48 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
牛角粉(標準品)英文名稱: Laminarin from Laminaria digitataγ-谷酰轉(zhuǎn)肽5輕鏈抗體包裝5g
翁花(標準品)英文名稱: Pancreatinγ-谷酰轉(zhuǎn)肽7輕鏈抗體包裝50mg
仙苷(標準品)英文名稱: Papain溶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白抗體包裝1g
楊苷(標準品)英文名稱: Papain糖原合激3α+β抗體包裝5g
楊梅根(標準品)英文名稱: PancreatinG2期/S期應答相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
楊酯(標準品)英文名稱: Pancreatin生長分化因子8/肌肉抑制抗體包裝5g
蛭(螞蟥)(標準品)英文名稱: Orphenadrine citrate磷化糖原合激3α/β抗體包裝25g
絲瓜甙B英文名稱: β-GalactosidaseSEC63域內(nèi)含蛋白1抗體包裝5g
絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖酯英文名稱: Abscisic acid,S-ABAA型病H7N9 M1蛋白抗體包裝1g
斯皮諾(標準品)英文名稱: Abscisic acid,S-ABA人類狀瘤病33 E6蛋白抗體包裝5g
四氫小檗堿(標準品)英文名稱: Abscisic acid,S-ABABeta基己糖苷beta亞基蛋白A鏈抗體包裝10MG
四氫鴨腳木堿英文名稱: PEPSIN磷化熱休克蛋白-70抗體包裝100g
松柏;4-羥基-3-氧基肉桂(標準品)英文名稱: Ribonuclease A from bovine pancreas磷化熱休克蛋白-70抗體包裝25g
松果菊苷(標準品)英文名稱: Andarine19號染色體開放閱讀框38抗體包裝5g
松苓新英文名稱: PEPSIN乙酰肝抗體包裝10mg
光滑假絲酵母Candida│glabrata 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR末端補體復合物C5b-9試劑盒雷公藤內(nèi)酯;Triptolide,14
陰溝腸桿菌Enterobacter│cloacae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標準品膜內(nèi)酰基肽試劑盒路路通;Liquidambaric a
雷夫松氏菌Leifsonia│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>95%,蛋白≤0.1%膜聯(lián)蛋白A2試劑盒利卡靈-B;(-)-Licarin B
孕酮受體高親和力激動劑(Nestoron)胰島再生因子ICRF抗體American Ginseng (Panax quinquefolius) Root Extract #4 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
/血管緊張形成Ren1抗體American Ginseng (Panax quinquefolius) Root Extract #3 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
分泌性蛋白RSPO1抗體American Ginseng (Panax quinquefolius) Root Extract #2 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
RAS的GTP激活蛋白抗體American Ginseng (Panax quinquefolius) Root Extract #1 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse
G蛋白P21 RAC2抗體Chinese Ginseng (Panax ginseng) Root Extract #6 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
GTP結(jié)合蛋白RAC1+RAC2抗體Chinese Ginseng (Panax ginseng) Root Extract #5 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse
ras癌因家族Rab8蛋白/原癌因c MEL抗體Chinese Ginseng (Panax ginseng) Root Extract #4 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse
ras癌因家族Rab2抗體Chinese Ginseng (Panax ginseng) Root Extract #3 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse
ras癌因家族Rab3a抗體Chinese Ginseng (Panax ginseng) Root Extract #2 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat