詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
A66 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
A66是一種高特異性的選擇性的p110α抑制劑,IC50為32nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:1166227-08-2 純度:99.26% 分子量:393.53 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
洋蔥伯克霍爾德菌人水通道蛋白2Paenibacillus mucilaginosus小鼠胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)
紫皮麗菇人水通道蛋白1Bacillus mycoides小鼠胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)
豬鏈球菌分型血清參考品 血清型 SS12人水通道蛋白0Bacillus mycoides小鼠胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)
釀酒酵母人類風濕因子Bacillus mycoides小鼠白介16(IL-16)
桑樹枝枯病人抗鏈球菌溶血O/抗OBacillus mycoides小鼠白介16(IL-16)
拜耳接合酵母人腎上腺皮質抗體Bacillus mycoides小鼠白介3(IL-3)
鏈格孢人抗腎小球基底膜抗體Bacillus mycoides小鼠白介3(IL-3)
熒光假單胞菌人β2微球蛋白Bacillus mycoides小鼠白介4(IL-4)
枯草芽孢桿菌人膜聯蛋白ⅤBacillus mycoides小鼠白介4(IL-4)
毛栓菌人抗腎小管基底膜抗體Bacillus niacini小鼠白介-5(IL-5)
橄欖灰鏈霉菌人apelin 13Bacillus oleronius小鼠白介-5(IL-5)
根霉人Apelin 36Bacillus pseudofirmus小鼠層連蛋白/板層(LN)
新月彎孢人肌鈣蛋白TBacillus pseudofirmus小鼠層連蛋白/板層(LN)
巴氏醋桿菌人血管內皮抑抗體Bacillus pseudofirmus小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)
奇異球菌屬人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型Sporosarcina psychrophila小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)
球孢白僵菌人血管生成樣蛋白3Bacillus psychrosaccharolytic小鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)
鋅指蛋白263抗體梨干枯擬莖點菌大鼠心肌細胞
鋅指蛋白195抗體丁香絲膜菌人的腎小球內皮細胞
鋅指蛋白266抗體栓黑管菌小鼠腎足細胞
鋅指蛋白786抗體稻平臍蠕孢(斜面)人支氣管上皮細胞
p110α抑制劑(A66)澳型核果褐腐病 3,3,-二氨基聯苯
微小桿 阿奇霉
谷棒桿 3,3-二氨基聯苯四鹽酸鹽
黑蔥花霉(只確定屬) 側金盞花
蒼白桿 3,3-二氨基聯苯四鹽酸鹽
孟氏假單胞 艾黃
枯草芽孢桿 3,3-二氨基聯苯四鹽酸鹽
地星 阿魏酸鈉
靴狀 3',6'-二熒光
枯草芽孢桿 2,7-二熒光
島青霉 阿魏酸松柏酯
環狀芽胞桿 二乙酸螢光
黃瓜枯萎病 遠志糖苷C
科氏葡萄球 王不留行環肽B
大腸埃希氏桿 異硫酸熒光