商品介紹:
SH5-07是一種基于異羥肟酸的Stat3抑制劑,在體外實驗中的IC50值為3.9±0.6μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1456632-41-9 純度:98.0% 分子量:625.61 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Stat3抑制劑(SH5-07) | SH5-07 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
桃褐腐核盤菌Rhizobium sp.
中國臺灣根霉Azospirillum sp.
黃絲膜菌Rhizobium sp.
腸膜明串珠菌Azospirillum sp.
釀酒酵母Rhizobium sp.
大腸埃希菌Rhizobium sp.
圍小從殼Corynebacterium ammoniagenes
臭曲霉Corynebacterium ammoniagenes
盲腸腸球菌Corynebacterium ammoniagenes
薄花邊傘7-5Corynebacterium ammoniagenes
單胞菌Corynebacterium ammoniagenes
費氏中華根瘤菌Corynebacterium ammoniagenes
約氏乳桿菌Corynebacterium ammoniagenes
放線多孢菌Corynebacterium ammoniagenes
暗點雙座炭殼菌Corynebacterium ammoniagenes
氏富鹽菌Corynebacterium ammoniagenes
小鼠總膽紅(TB)免疫試劑盒磷化鈉ATPα1多肽抗體人粒巨噬集落激因子(GM-CSF)對羥基肉桂
小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)免疫試劑盒Na+/K+-ATPase α1 鈉ATPα1抗體人粒巨噬集落激因子(GM-CSF)對傘花烴
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)免疫試劑盒肌動蛋白樣蛋白6B抗體人膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)對香豆
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)免疫試劑盒脊髓小腦共濟失調(diào)蛋白7抗體人膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)對葉百部堿
Stat3抑制劑(SH5-07)5HT5A receptor 英文名稱: 5-羥色胺受體5A抗體 0.2ml
E2F3 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄因子E2F-3抗體 0.1ml
金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體 Anti-TIMP-2 0.1ml
Anti-TNF-alpha/ TNF- Alpha /FITC 熒光素標(biāo)記鼠抗人壞死因子-α單克隆抗體 IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Kidins220 (Ser918) 磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
PDGF-A 血小板源性生長因子-1(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg