化工儀器網
詳細介紹
公司產品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
產品屬性：
中文名稱：GSK-3β抑制劑(IM-12)
英文名稱：IM-12
產品規格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
發貨周期：1～3天
商品介紹：
IM-12是GSK-3β的抑制劑，IC50值為53nM，可增強Wnt信號傳導。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ CAS號：1129669-05-1 純度：96.45% 分子量：377.41 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
鐮刀菌Bacillus sp.豬血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)
蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種Yangia pacifica豬凋亡相關因子(FAS/CD95)
黑曲霉Paenibacillus amylolyticus豬凋亡相關因子(FAS/CD95)
鏈格孢菌Brevibacillus centrosporus豬B淋巴瘤因子2(Bcl-2)
波羅的海西瓦氏菌Brevibacillus borsensis豬B淋巴瘤因子2(Bcl-2)
米曲霉Paenibacillus curdanolyticus豬Bcl-2相關X蛋白(BAX)
*匍枝根霉Paenibacillus illinoisensis豬Bcl-2相關X蛋白(BAX)
四川散斑殼Desulfomicrobium baculatum豬(HYD)
檸檬明串珠菌Halobacillus locisalis豬(HYD)
野油菜黃單胞菌棲青莧致病變種Xanthobacter aminoxidans豬一氧化氮(NO)
科羅多擬無枝菌Xanthobacter tagetidis豬一氧化氮(NO)
Brenneria salicisVibrio shilonii豬內皮型一氧化氮合成(eNOS)
新疆交替紅色桿菌Arthrobacter sp.豬內皮型一氧化氮合成(eNOS)
Lonsdalea quercina subsp. quercinaSphingomonas sp.豬內皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)
局限曲霉Brevibacterium sp.豬內皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)
頭孢霉屬Arthrobacter sp.豬血管生成2(ANG-2)
琥珀脫氫復合體亞基A抗體紅曲波莫納沙門氏菌
山梨脫氫抗體葫蘆科刺盤孢(西瓜炭疽病菌、黃瓜炭疽病菌)基桑加尼沙門氏菌
突觸樣蛋白5亞型2抗體串珠鐮孢(稻惡苗病菌)布瓦約沙門氏菌
S100鈣結合蛋白A11抗體頂孢木霉格伯捷斯沙門氏菌
GSK-3β抑制劑(IM-12)STK2 英文名稱： 絲酸/蘇酸蛋白激酶2抗體 0.2ml
EBNA 3A 英文名稱： EB病毒核抗原-3A抗體 0.2ml
半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(C端) Anti-Caspase-6 0.1ml
Anti-Phospho-Tyk2 (Tyr1054/1055)/FITC 熒光素標記磷酸化非受體酪氨酸蛋白激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-HRH1(Ser398) 磷酸化組胺受體H1抗體 規格 0.1ml
CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 單核細胞趨化蛋白5抗原Multi-class antibodies規格： 0.5mg
化工儀器網