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詳細介紹
商品介紹：
GNE-493是一個高效選擇性且具的雙重泛PI3K/mTOR抑制劑，對PI3Kα/PI3Kβ/PI3Kγ/PI3Kδ/mTOR的IC50值分別為3.4/12/16/16/32nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ CAS號：1033735-94-2 純度：98.19% 分子量：372.44 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
GNE-493 | 1mL(10mM)|5mg|10mg | 1～3天 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
無色桿菌屬Arthrobacter sp.
黃桿菌Cryobacterium psychrotolerans
釀酒酵母Micrococcus sp.
栗疫菌Bacillus sp.
枯草芽孢桿菌Brevundimonas sp.
枯草芽孢桿菌Arthrobacter sp.
黑曲霉Achromobacter xylosoxidans
南方散斑殼Escherichia coli
暗鱗白鬼傘Pseudomonas aurantiaca
多源中間根瘤菌Pseudomonas stutzeri
豬丹絲菌Pseudomonas agarici
灰樹花GF-5Pseudomonas fragi
林生毛霉Pseudomonas putida
佐氏庫特氏菌Pseudomonas corrugata
枯草芽孢桿菌Pseudomonas lundensis
施氏假單胞菌Pseudomonas oleovorans
緩生解新鞘菌Novosphingobium│tardaugens 質量規格：HPLC法含量測定
檸檬色赤桿菌Erythrobacter│citreus 質量規格：含量測定
靈芝Ganoderma│lucidum 質量規格：供HPLC法含量測定用
雙重泛PI3K/mTOR抑制劑(GNE-493)STIL 英文名稱： 中斷位點蛋白STIL抗體 0.2ml
ELMO1 英文名稱： 吞噬細胞運動蛋白1抗體 0.2ml
鼠抗人促甲狀腺素單克隆抗體 Anti-TSH 0.1ml
Anti-TRF1/FITC 熒光素標記端粒結合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-IRF3 (Ser396) 磷酸化干擾素調節因子3 規格 0.1ml
Alpha-Synuclein 核突觸蛋白(抗原)Multi-class antibodies規格： 0.5mg
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