化工儀器網
詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
PF-670462 | 1mL(10mM)|10mg|50mg | 1～3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：
PF-670462是CK1ε的選擇性抑制劑，IC50為7.7nM，比對其它42種激酶的抑制性高30倍以上。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ CAS號：950912-80-8 純度：99.28% 分子量：410.32 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
凍土毛霉小鼠顆粒BAnti-PRPF18 Antibody人白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)
谷棒桿菌人幽門螺桿菌相關基因蛋白A-IgGAnti-PROCR Antibody人白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)
茄病鐮刀菌大鼠P53Anti-PRPF31 Antibody人C型凝集結構域家族4成員E(CLEC4E)
粘質沙雷氏菌人粘蛋白/粘液7Anti-PRPF19 Antibody人C型凝集結構域家族4成員E(CLEC4E)
澳型核果褐腐病菌大鼠環磷鳥苷Anti-PRPF39 Antibody人假定蛋白LOC677168
總狀共頭霉小鼠血管內皮生長因子受體1Anti-PRPF39 Antibody人假定蛋白LOC677168
擬莖點霉大鼠一氧化氮合成Anti-PRPH Antibody人淋巴抗原6復合物基因座A(Ly6a)
Pantoea eucalypti大鼠Y-谷酰轉肽Anti-PRPF38A Antibody人淋巴抗原6復合物基因座A(Ly6a)
傘枝梨頭霉小鼠顆粒AAnti-PRSS1 Antibody人嗜性白血球相關之RNA水解酵家族成員1(EAR1)
淡青鏈霉菌小鼠淋巴趨化因子Anti-PRSS33 Antibody人嗜性白血球相關之RNA水解酵家族成員1(EAR1)
詹氏桿菌人Ⅰ型前膠原N端前肽Anti-PRSS3 Antibody人混合系列蛋白激樣結構域(MLKL)
黑木耳大鼠誘導型一氧化氮合成Anti-PRPH Antibody人混合系列蛋白激樣結構域(MLKL)
大腸埃希菌大鼠內皮型一氧化氮合成Anti-PSG1 Antibody人過氧化物體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)
貝葉多孔菌人Ⅰ型膠原交聯羧基末端肽Anti-PSEN1 Antibody人過氧化物體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)
馬賽菌小鼠血管內皮生長因子受體2Anti-PSKH1 Antibody人類似cDNA順序BC027382
蠟狀芽孢桿菌小鼠末端補體復合物C5b-9Anti-PSMD11 Antibody人類似cDNA順序BC027382
味覺受體蛋白家族2亞基7抗體叢片韌革菌TE-9 人食管癌細胞
味覺受體蛋白家族2亞基50抗體李木層孔菌人高轉移肝癌細胞
跨膜蛋白59抗體翹鱗傘膽管上皮癌細胞
TATA結合蛋白TBP抗體古巴光蓋傘小鼠T淋巴瘤細胞（雞OVA基因修飾）
CK1ε抑制劑(PF-670462)銳頂鐮孢 芴甲氧羰酰
嗜鹽鹽單胞 阿斯巴甜
鐮雄腐霉 D-別異亮
白囊耙齒 L-高絲
短桿狀馬賽 L-叔亮
Mumia flava L-谷-5-甲酯
枯草芽孢桿 L-天門冬鈣
棉花枯萎病 Z-甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰對醋酸鹽
嗜熱鏈球 D-纈氨酰-L-白氨酰-L-賴對
大豆慢生根瘤 N-苯甲酰-L-纈氨酰甘氨酰-L-精對鹽酸鹽
熱吸水鏈霉銹赤亞種 FMOC-D-纈
斯氏土地桿 FMOC-D-色
蝕脈鐮孢尖銳變種 FMOC-L-色
直桿糖多孢 FMOC-L-蘇
腐皮殼 Fmoc-L-羥脯
化工儀器網