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  轉(zhuǎn)化細(xì)胞可以自我更新并分化成各類成體細(xì)胞, 常用的多能干細(xì)胞主要是廢棄胚胎來源的胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell, ESc)和重 編 程 成體細(xì)胞獲得的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cell, iPSc)。

iPSc是通過過表達(dá)胚胎期的多能性標(biāo)志, 將已經(jīng)分化的終末細(xì)胞重編程至多能狀態(tài)獲得的, 因其不需要破壞胚胎, 又具ESc相近的生物學(xué)特性, 是近期醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究的熱點(diǎn)。iPSc通過定向誘導(dǎo)分化, 可以獲得各類成熟的、有功能的細(xì)胞, 這一方面是研究生物發(fā)育的忠實(shí)體外模型, 另一方面為再生醫(yī)學(xué)提供了優(yōu)良的種子細(xì)胞。肝臟是重要的代謝臟器, 肝細(xì)胞如何再生、肝細(xì)胞代謝功能障礙疾病的病理機(jī)制以及肝細(xì)胞移植治療肝臟類疾病的種子細(xì)胞都可以通過研究誘導(dǎo)iPSc的肝細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化解決。

早在2004年, 就有對人多能干細(xì)胞進(jìn)行肝分化的研究報(bào)道。當(dāng)時(shí)終末分化所得的白蛋白(albumin, ALB)陽性細(xì)胞僅為4%。隨著技術(shù)的改進(jìn)和對肝細(xì)胞分化過程中信號通路研究的日益透徹, 誘導(dǎo)分化多能干細(xì)胞至成熟肝細(xì)胞的效率也日益提高, Duncan研究組提出了四步法誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化獲得成熟肝細(xì)胞的方案。

該方案總結(jié)了各個(gè)提高分化效率的轉(zhuǎn)化細(xì)胞因子的效果并進(jìn)行優(yōu)化, 還提出每一步的分化結(jié)果的質(zhì)控, 有效地將肝細(xì)胞核因子4A(hepatocyte nuclear factor4alpha, HNF4A)和ALB陽性細(xì)胞獲得率提高到了70%以上。我們按照Duncan的分化方案進(jìn)行iPSc的肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化, 發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞核因子4A陽性率可以達(dá)到70%, 但是ALB 陽性細(xì)胞獲得率僅為20%, 而且歷時(shí)20 d, 在第三和第四階段誘導(dǎo)分化時(shí), 因?yàn)榧?xì)胞形成復(fù)層, 很容易在換液時(shí)造成培養(yǎng)皿中的細(xì)胞整片飄起, zui終引起分化失敗。我們在第二和第三階段分化結(jié)束時(shí)行細(xì)胞傳代, 探討傳代破壞細(xì)胞之間的連接是否對第三和第四階段分化的結(jié)果產(chǎn)生影響, 能否優(yōu)化方案, 促進(jìn)多能干細(xì)胞向肝細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化。
97%    規(guī)格:        *：    Salvianolic acid A    丹酚酸A
≥95%    規(guī)格:        *：    Salvianolic acid B    丹酚酸B
98%    規(guī)格:        *：    Salvianolic acid C    丹酚酸C
≥98%    規(guī)格:        *：    Paeonol    丹皮酚
≥95%    規(guī)格:        *：    Lobetyolin    黨參炔苷
≥97%    規(guī)格:        *：    deltaline    德爾塔林
≥97%    規(guī)格:        *：    Momordin Ic    地膚子皂苷Ic
≥98%    規(guī)格:        *：    Indirubin    靛玉紅
98%    規(guī)格:        *：    eugenol    丁香酚
≥97%    規(guī)格:        *：    3,5-Dimethoxy-4-hydroxybenzaldehyde    丁香醛
轉(zhuǎn)化細(xì)胞