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小鼠P物質（SP）ELISA免費代測試劑盒操作步驟：

1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。

2. 分組：取出 96 孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準

品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

3. 加樣：依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul

的待測樣本。

4. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）。

5. 溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標板 5 次，用吸水紙*拍干。

7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。

9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的 30 分鐘內，以免影響準確性。

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