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干細(xì)胞的軟瓊脂集落培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
閱讀：595 發(fā)布時(shí)間：2018-3-22干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法原理
HL-60細(xì)胞是一種急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養(yǎng)基中形成集落。二甲基亞砜是一種細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑，經(jīng)二甲基亞砜處理后的HL-60細(xì)胞按粒系途徑定向成熟分化，同時(shí)細(xì)胞的增殖力降低，幾乎全部細(xì)胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。因此，這種方法可用于細(xì)胞分化的基礎(chǔ)研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗(yàn)等方面。
實(shí)驗(yàn)材料
HL-60細(xì)胞
試劑、試劑盒
小牛血清 RPMI1640培養(yǎng)液 臺盼蘭 瓊脂 二甲基亞砜
儀器、耗材
超凈工作臺 二氧化碳培養(yǎng)箱 顯微鏡 培養(yǎng)瓶 吸管 酒精燈 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 多孔培養(yǎng)板
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 收集對數(shù)生長期的HL-60細(xì)胞，先按實(shí)驗(yàn)十三測定細(xì)胞活力，然后調(diào)整細(xì)胞濃度，制成300~1 000活細(xì)胞/ml 的細(xì)胞懸液。
2. 取二個(gè)培養(yǎng)瓶每個(gè)瓶中加9 ml 調(diào)整好濃度的細(xì)胞懸液，然后各加入1 ml 3%瓊脂（已融化，在65℃水浴中放置），迅速加入，混勻。
3. 用微量加樣器吸140 μl 二甲基亞砜（MDSO），加到一個(gè)瓶中，充分混勻，為實(shí)驗(yàn)組，另一瓶不加DMSO，為空白對照組。
4. 取一個(gè)16 mm 多孔培養(yǎng)板，每孔加1 ml（35 mm 培養(yǎng)皿需加2 ml）細(xì)胞瓊脂懸液，勿有氣泡，將實(shí)驗(yàn)組和對照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標(biāo)記。
5. 在室溫放置20分鐘使細(xì)胞瓊脂懸液凝固。
6. 然后移培養(yǎng)板或平皿于CO2培養(yǎng)箱中37℃進(jìn)行培養(yǎng)。
7. 培養(yǎng)7~10天，肉眼觀察并計(jì)數(shù)細(xì)胞集落。
8. 結(jié)果：以肉眼可見的細(xì)胞團(tuán)（含500個(gè)以上細(xì)胞）作為計(jì)數(shù)集落的標(biāo)準(zhǔn)。對照組HL-60細(xì)胞在含0.3%的軟瓊脂培養(yǎng)基中生長良好，每個(gè)孔中可見有多個(gè)集落形成，而實(shí)驗(yàn)組HL-60細(xì)胞因經(jīng)二甲基亞砜誘導(dǎo)分化，細(xì)胞在軟瓊脂中的集落形成明顯減少。
9. 干細(xì)胞集落的計(jì)數(shù)和計(jì)算：
（1）集落數(shù)=n孔中細(xì)胞集落數(shù)總和/n孔
（2）集落形成率=集落數(shù)/接種培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)×100%
Cladribine Related Compound A 克拉曲濱相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 24757-70-8 20mg
西替利嗪相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 246870-46-2 20mg
Doxazosin Related Compound C 多沙唑嗪相關(guān)雜質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 23680-84-4 20mg
依法韋侖相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 209414-27-7 20mg
左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 18910-68-4 20mg
Abacavir Sulfate Racemic 外消旋阿巴卡韋標(biāo)準(zhǔn)品 188062-50-2 20mg
Actein 黃肉楠堿標(biāo)準(zhǔn)品 18642-44-9 20mg
左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)G標(biāo)準(zhǔn)品 182676-90-0 20mg
外消旋依法韋侖標(biāo)準(zhǔn)品 177530-93-7 20mg
Dofetilide Related Compound A 多非利特相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 176447-94-2 20mg
干細(xì)胞