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技術文章

干細胞的原理

閱讀:391          發布時間:2017-9-28

干細胞原理:
轉化(Transformation ):將外源DNA 分子引入受體細菌,使之獲得新的遺傳性狀。
受體細菌一般是限制修飾系統缺陷的變異株,不含限制性內切酶 和甲基化酶的突變體(R-,M-),可以容忍外源DNA 分子進入體內并穩定地遺傳給后代。受體細胞經過一些特殊方法,如電擊或CaCl2 、RbCl/KCl等化學試劑的處理后,細胞膜的通透性增高,成為感受態細胞(Compenent cells),使外源DNA 分子得以進入。
目前常用的感受態細胞制備方法有CaCl2 和RbCl/KCl法,RbCl/KCl法制備的感受態細胞轉化效率較高,但CaCl2 法簡便易行,且其轉化效率*可以滿足一般實驗的要求,制備出的感受態細胞暫時不用時,可加入無菌甘油至總體積15%,于-70℃保存半年之久,因此CaCl2 法為使用更廣泛。
準備:
1、配制0.05mol/L CaCl2 -15%甘油混合溶液,高溫高壓滅菌;
注: CaCl2 必須為分析純以上。
2、實驗中所需的所有試管 、培養瓶 、離心管 等均要用去離子水*清洗干凈,高溫高壓滅菌;
注: 有制備感受態細菌的一套實驗器材。
3、受體菌的培養:干細胞從非選擇性LB平板上挑取E.coli單菌落,接種于3-5ml LB液體培養基中,37℃振蕩培養過夜至對數生長中后期。將該菌懸液以1:100的比例接種于50~100ml LB液體培養基中,37℃振蕩培養2.5小時至OD600 =0.5。注:培養時間不宜超過2.5小時,否則不能達到轉化效率。
產品名稱:    Anti-Cdc2/P34CDC2/CDK1    規格:    0.1ml    周期素依賴激酶1抗體
產品名稱:    Anti-Cdc34    規格:    0.1ml    細胞周期調控因子34
產品名稱:    Anti-Cdc6    規格:    0.1ml    細胞分裂周期蛋白6抗體
產品名稱:    Anti-CDK1       規格:     0.1ml    周期素依賴性激酶1抗體
產品名稱:    Anti-CDK2       規格:     0.1ml    周期素依賴性激酶2抗體
產品名稱:    Anti-CDK3    規格:    0.1ml    周期素依賴性激酶3抗體
產品名稱:    Anti-CDK4       規格:     0.1ml    周期素依賴性激酶4抗體
產品名稱:    Anti-CDK5      規格:     1ml    周期素依賴性激酶5抗體
產品名稱:    Anti-CDK6       規格:     0.2ml    周期素依賴性激酶6抗體
干細胞

 

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