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一、產(chǎn)品簡介
英諾思(immuno-X)小鼠 NK 細胞分離試劑盒采用陰選的方式，通過無柱磁極分離小鼠脾臟中的NK細胞。分離過程中抗體和磁珠不會接觸NK細胞，能夠最大限度保持NK細胞最原始的狀態(tài)。
. 操作簡便
. 無需裂紅
. 純度最高可達95%
. 18-20分鐘完成分離
該試劑盒通過生物su偶聯(lián)的抗體標記非NK細胞，再將細胞和鏈霉親和素納米磁珠孵育偶聯(lián)，然后通過磁極進行無柱分離。目標細胞只需倒入一個新的管中即可分離，分離后的細胞可立即用于后續(xù)應(yīng)用，如流式細胞術(shù)、細胞培養(yǎng)和功能實驗等。
二、試劑盒組分
產(chǎn)品名稱 | 存儲條件 | 緩沖液成分 | 功能 |
EasyIso TM Mouse NK Cell Isolation Cocktail | 4°C保存，避免冷凍 | PBS, 0.1% BSA | 識別非 NK細胞抗體混合液，標記非目的細胞 |
EasyIso TM Streptavidin Nanobeads | 4°C保存，避免冷凍 | PBS, 0.1% BSA | 磁珠結(jié)合非 NK細胞，通過磁極去除 |
BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline 運輸條件： 4°C運輸
設(shè)備和試劑要求
. 緩沖液：FACS Buffer (1 x PBS+0.02% EDTA+2% FBS)
. 耗材：70 μm無菌尼龍濾網(wǎng)；無菌離心管
. 儀器：離心機 ，磁力架
溫馨提示
. 小鼠脾臟研磨后采用70 μm無菌尼龍濾網(wǎng)過濾即可用于分離 ，無需采用紅細胞裂解液
. 采用FACS Buffer而不是PBS進行操作 ，能夠提高細胞得率
. 確保FACS Buffer滲透壓穩(wěn)定，免疫細胞較為敏感
. 確保每一步無菌操作，謹防污染
三、操作步驟
步驟 |
說明 |
劑量和時間 |
1 | 準備脾臟單細胞懸液至指定濃度 | 1 x 10^8 cells/mL |
2 | 加入EasyIso TM Mouse NK Cell Isolation Cocktail至樣品中 | 100 μL/mL |
3 | 抗體和細胞孵育 | 常溫孵育10 min |
4 | 震蕩混勻 Streptavidin Nanobeads | 混勻30 s |
5 | 加Streptavidin Nanobeads至樣品中 | 100 μL/mL |
6 | 輕柔混勻磁珠和細胞，孵育 | 常溫孵育5 min |
7 | 加入FACS Buffer到樣品中，輕輕混勻 | 總體積加入至2.5 mL （ 5 mL流式管） 總體積加入至 7.5 mL (15 mL離心管) |
8 | 樣品置于磁力架上 ，使磁珠吸附 | 單孔磁力架吸附（3 min） 聯(lián)排磁力架吸附（5 min） |
9 | 傾斜磁力架，將樣品倒入新的收集管中，收集樣品 | 細胞分離成功 |
三、操作步驟
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