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北京百奧創新科技有限公司

碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態細胞(D1019S)現貨供應

時間:2024-4-17 閱讀:1142
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產品名稱:碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態細胞(D1019S)現貨供應

產品貨號:D1019S

產品品牌:碧云天

產品簡介:

碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態細胞是一種可以用于將異源蛋白以超高水平表達的E. coli BL21 Star(DE3)即用型化學感受態細胞。使用pUC19質粒進行熱激活轉化,轉化效率可以高達1×108cfu/μg DNA以上。

E. coli細胞具有內源性的mRNA降解小體,其中包含由rne131基因編碼的RNase E。BL21 Star(DE3)中rne131的基因突變,導致RNase E功能缺陷,增加了目的基因的mRNA穩定性,表現為重組蛋白的超高得率。

使用說明:

1.解凍感受態細胞。取感受態細胞放置冰浴或冰水浴中融化,通常需要5分鐘以上的時間。解凍后須盡量在10分鐘內使用,放置時間過長會影響轉化效率。

2.DNA樣品的轉化。取一管感受態細胞,加入DNA樣品,例如質粒、連接產物或重組產物等,輕輕彈擊管底約2-3次或輕輕晃動約2-3次以混勻,立即冰浴靜置30分鐘。

注:所用DNA體積通常不宜超過感受態細胞體積的10%,混合時不得使用移液器進行吹打。如果用于質粒的轉化擴增,冰浴靜置約10分鐘,后續可以直接涂板并培養過夜;如果用于連接產物或重組產物的轉化,建議冰浴靜置30分鐘并嚴格執行后續的熱激處理和復蘇培養等步驟,以提高轉化效率。

3.熱激處理。將冰浴放置的離心管快速置于42℃水浴中,靜置熱激45秒。隨后立即轉移至冰水浴中靜置2分鐘以快速冷卻至接近零度。熱激及轉移至冰浴過程中切勿晃動離心管。

4.復蘇培養。加入900μl不含抗生素的LB培養基,顛倒數次混勻,37℃搖床約150rpm復蘇培養1小時。如果用于質粒的轉化擴增,復蘇培養10-20分鐘也wan全足夠了;如果用于連接產物或重組產物的轉化,建議嚴格進行復蘇培養操作。

5.收菌涂板。約5000×g室溫離心1分鐘,沉淀細菌,吸除約900-950μl上清,余下約50-100μl上清。用移液器輕輕吹打并重懸菌體,隨后涂布到含相應抗生素的LB平板上。

注:如果用于質粒的轉化擴增,可以僅取少量進行涂板;如果用于連接產物或重組產物的轉化,建議取所有重懸的菌液涂板。

6.將平板倒置放于37℃培養箱培養過夜。

產品選購:

貨號

產品名稱

規格

 D1019S

 BL21 Star(DE3)超級感受態細胞

10×100μl

50×100μl

北京百奧創新科技有限公司現貨供應碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態細胞(D1019S),歡迎選購!

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