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mIHC多色技術(shù)在三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)TLS研究中的應(yīng)用分享

閱讀:1813      發(fā)布時(shí)間:2021-3-24
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mIHC多色技術(shù)在三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)TLS研究中的應(yīng)用分享:
三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(Tertiary lymphoid structures,TLSs)是近來腫瘤免疫治療的新熱點(diǎn),其產(chǎn)生并存在于腫瘤等慢性炎癥部位附近,因而相較于二級(jí)淋巴器官、能更高效地抑制相關(guān)炎癥反應(yīng)。三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)因其直接的位置分布及強(qiáng)大的免疫功能,在腫瘤免疫治療中被寄予厚望。  
三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)TLS示意圖,圖片來源于自網(wǎng)絡(luò) 
本文研究了在G1/G2期非功能性胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)TLS的分布、細(xì)胞組成、與腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞的相關(guān)性以及預(yù)后價(jià)值。其主要方法就是對(duì)取自兩個(gè)隊(duì)列的患者腫瘤組織樣本進(jìn)行HE染色、IHC及mIHC染色分析。 
研究發(fā)現(xiàn)超過1/ 3的G1/G2期非功能性胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤樣本中發(fā)現(xiàn)了TLS,且位于瘤周、腫瘤組織外沿或間質(zhì)區(qū)。TLS主要由帶有生發(fā)中心的B細(xì)胞濾泡和帶有樹突狀細(xì)胞的T細(xì)胞區(qū)組成。Kaplan-Meier分析顯示,TLS的存在與更長(zhǎng)的無復(fù)發(fā)生存期(RFS, p<0.001)和總生存期(OS, p=0.001)相關(guān),而TLS的數(shù)量則沒有預(yù)后意義。 

三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)TLS的IHC及組織學(xué)情況 
 

如上圖所示,研究者首先用常規(guī)IHC方法鑒定了TLS中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD20+B細(xì)胞、CD11c+DCs、CD45RO+記憶性T細(xì)胞、NCR1+的NK細(xì)胞、FOXP3+Tregs和CD68+的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞TAMs;進(jìn)而根據(jù)IHC的結(jié)果,選擇對(duì)TLS中作為主要組成的CD45RO+記憶性T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD20+B細(xì)胞進(jìn)行mIHC多色共定位,結(jié)果如下圖所示,深入定量分析可知TLS中占比較多的是39.35%的CD45RO+記憶性T細(xì)胞,然后是36.61%的CD20+B細(xì)胞、20.05%的CD4+T細(xì)胞以及3.99%的CD8+T細(xì)胞。

非功能性胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤樣本的mIHC多色結(jié)果
 


后續(xù)的研究,研究者探討了TLS存在與否和兩組隊(duì)列樣本無復(fù)發(fā)生存期RFS及總生存期OS的關(guān)系,結(jié)果如下圖所示,TLS顯著提升了兩組隊(duì)列RFS和OS值。

Association of the presence of TLS with RFS and OS in the Fudan cohort (A,B) and external validation set (C,D).
 


本文研究人員認(rèn)為三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)TLS在G1/G2期非功能性胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中表征了一個(gè)免疫應(yīng)答微環(huán)境,并且有潛力成為分析RFS和OS的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。 
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六指標(biāo)七色(含DAPI)的多色免疫組化服務(wù)(芯片四指標(biāo)五色),樣本涵蓋石蠟切片、冰凍切片及組織芯片(TMA),組織大片請(qǐng)?zhí)峁﹩螇K組織切片,F(xiàn)FPE樣本,厚度3-5um。正式實(shí)驗(yàn)大概
每例2張,1張備用。預(yù)實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)量根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)方案定。

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2.客戶約定區(qū)域的單細(xì)胞分析結(jié)果:

  • 單陽性細(xì)胞占有核細(xì)胞百分比,密度。
  • 雙陽性細(xì)胞占有核細(xì)胞百分比,密度。
  • 組織面積和特定病理形態(tài)面積計(jì)算。
  • TMA提供每個(gè)芯點(diǎn)的以上定量結(jié)果。

 

Absin多色試劑盒(abs50032) 

組分信息: SuperNova系列染料(可選)、信號(hào)放大反應(yīng)液、鼠兔通用型或者抗兔抗鼠HRP標(biāo)記二抗、抗熒光淬滅封片劑、DAPI 
產(chǎn)品特點(diǎn): 可快速完成高達(dá)六指標(biāo)七色的熒光多標(biāo)記; 染料經(jīng)過優(yōu)化處理,相比普通染料,強(qiáng)度更高,持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng); 有組化經(jīng)驗(yàn)即可操作,染色無需特殊儀器,提供詳細(xì)的protocol

貨號(hào)名稱規(guī)格
abs50032多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒(組合系列)100T

 

Absin特色產(chǎn)品線(全部現(xiàn)貨):
WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動(dòng)劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

 

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