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2025/02/13
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內(nèi)毒素（Endotoxin）是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的結(jié)構(gòu)，又被稱為脂多糖或者“熱源”，是由菌體裂解后釋出的毒素，單位EU/ml。內(nèi)毒素耐熱，曾有人做過實(shí)驗(yàn)，在100℃的高溫下加熱內(nèi)毒素1小時(shí)，也不會(huì)破壞其結(jié)構(gòu)。
細(xì)胞培養(yǎng)中，培養(yǎng)體系中可能會(huì)收到內(nèi)毒素的干擾。生物實(shí)驗(yàn)室中，內(nèi)毒素主要來自于各類配試劑所用的水、各類培養(yǎng)基、血清及其他添加劑、實(shí)驗(yàn)器皿表面等。
內(nèi)毒素更像是一個(gè)“隱形的刺客”，日常實(shí)驗(yàn)中不顯山露水，關(guān)鍵時(shí)刻很可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成“致命一擊”，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差，影響實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性。
內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞的的影響
培養(yǎng)體系中的內(nèi)毒素侵染細(xì)胞后，會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖，可能會(huì)引起細(xì)胞型態(tài)的改變，導(dǎo)致細(xì)胞收縮；也可能會(huì)引發(fā)細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致信號(hào)通路的改變；還有可能影響蛋白的表達(dá)調(diào)控。
此前，有人做過實(shí)驗(yàn)，來觀察內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響，記錄的影響包括：刺激白細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生組織因子、激活鼠巨噬細(xì)胞，以及通過低水平的內(nèi)毒素抑制鼠類紅細(xì)胞集落形成等一系列指標(biāo)。
從現(xiàn)有的研究可以看出，內(nèi)毒素對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)影響還是很大的：改變細(xì)胞外形、活化細(xì)胞、產(chǎn)生訊息傳遞物質(zhì)、抑制酶活性、抑制人工受精的成功率等。
血清中內(nèi)毒素含量過高，更容易導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康”，造成數(shù)據(jù)不準(zhǔn)，或細(xì)胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡，導(dǎo)致試驗(yàn)中斷失敗。所以要盡量選擇內(nèi)毒素低的血清。
Ausbian血清
血清可能會(huì)成為細(xì)胞培養(yǎng)過程中，內(nèi)毒素的來源，因此，在選擇血清時(shí)，要重點(diǎn)關(guān)注內(nèi)毒素指標(biāo)。
以下幾類情況更應(yīng)關(guān)注內(nèi)毒素的影響：
1、養(yǎng)干細(xì)胞時(shí)，干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感，如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí)，干細(xì)胞很容易死亡。
2、養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí)，過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。
3、基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài)，任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑，都會(huì)讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘，謬以千里”。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí)，選擇極低的內(nèi)毒素（最好≤1EU/ml），對(duì)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。
4、原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染，或者肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增，這些都需要挑選好的血清給細(xì)胞以有力支持。因此，挑選更低的內(nèi)毒素，是保證實(shí)驗(yàn)順利的第一步。
5、實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞，需要長(zhǎng)期培養(yǎng)、長(zhǎng)期凍存，或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的，血清會(huì)經(jīng)常或長(zhǎng)時(shí)間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康，都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清，以避免內(nèi)毒素長(zhǎng)久對(duì)細(xì)胞的毒性影響。
Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清，所有血清出廠前，均經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控，每個(gè)批次附有詳細(xì)完整的《檢測(cè)報(bào)告》，對(duì)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)及含量有明確的標(biāo)識(shí)，精選內(nèi)毒素≤3EU/ml的批次，降低對(duì)細(xì)胞的影響。
