9
- 優質血清助力細胞學實驗 -
上期內容里，我們介紹了細胞轉染的基本基本知識，包括概念、應用場景以及各種方法之間的優劣對比。
本期內容，進一步為大家介紹常用的細胞轉染方法——實操篇。
- 細胞轉染常用方法 -
陽離子脂質體介導的轉染
原理：陽離子脂質體介導的轉染是目前常用的轉染方式之一。
陽離子脂質的基本結構由帶正電荷的頭基和一個或兩個烴鏈組成。
帶正電荷的頭基與帶負電荷的核酸通過靜電作用形成復合物。
經細胞的內吞作用進入細胞。
實驗過程：將DNA，RNA，siRNA或寡核苷酸和轉染試劑分別在不同的管中稀釋→將兩者混合形成混合物→將形成的混合物加入細胞中，脂質體的正電荷有助于幫助復合物粘附到細胞膜上→復合物經細胞內吞作用進入細胞→檢測基因表達或沉默情況。
磷酸鈣共沉淀
原理：將DNA與氯化鈣在磷酸緩沖鹽水中混合形成磷酸鈣-DNA沉淀物，然后將其分散在培養的細胞上，磷酸鈣促進共沉淀物中的縮合DNA與細胞表面的結合，DNA通過內吞作用進入細胞。
實驗過程：將氯化鈣和DNA混合，以可控的方式加入磷酸緩沖液→在室溫下孵育，以形成極細，可溶的共沉淀微粒→將磷酸鈣-DNA沉淀物加入細胞中，后者能黏附到細胞膜表面→共沉淀物經細胞內吞作用進入細胞→檢測基因表達或沉默情況。
病毒轉染
原理：對于用脂質體不能實現轉染的細胞，可以采用病毒轉染。腺病毒，逆轉錄病毒和慢病毒載體已廣泛用于哺乳動物細胞體內外的基因轉染。
實驗過程：通過基因克隆方法獲得重組病毒表達載體→轉染包裝細胞系，擴增并分離得到重組病毒顆粒→純化并滴定病毒液→轉導目的細胞（含病毒特異性的受體）→從培養基中移除病毒→檢測基因表達或沉默情況。
電轉
原理：利用電脈沖在細胞膜上形成暫時的孔使核酸物質能穿過孔進入細胞。
實驗過程：利用電轉緩沖液重懸細胞→對含有核酸，緩沖液，細胞的混合物給予合適的電脈沖→電脈沖在細胞膜上形成電勢差，誘導產生暫時的孔使核酸進入細胞→將細胞返回到生長培養基中，使其慢慢恢復→檢測基因表達或沉默情況。
血清在細胞培養過程中的重要性不言而喻：
-
提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。
-
提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調節它們所結合的物質活力。
-
有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。
-
是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。
-
起酸堿度緩沖液作用。
-
提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。
-
參與細胞凍存。
-
......
一款優質的血清，能成為細胞實驗的“*輔助”。
Ausbian進口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比，有*優勢：
1. 精選內毒素更低批次（≤3EU/ml），進口。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩定供應品牌。
2. 新批次在試用前，提供試用服務，養細胞更放心。
3. 每個批次產量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優先鎖定，保證大多數項目兩年不需換批次，細胞試驗數據穩定。
4. 每年按廠家生產順序，會有多批次平行供應，每個實驗室專屬批號管理，保證供貨穩定。
5. 為Ausbian血清用戶免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類項目的申報提供支持。（同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學驗證等方面，提供更多免費延伸性技術幫助）。
6. 針對特殊科研項目，可提供3-5個平行批次，讓試驗人有更多選擇空間。
7. 為Ausbian血清提供免費代儲存服務，為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護，按要求隨時發貨。
8. Ausbian血清從出廠，到實驗室，全程低溫冷鏈保護，確保血清無反復凍融。
9. 免費真品保障，每個血清瓶身加貼Viansaga®易破損防偽標簽，Ausbian品牌真品保護，逢假必究，為實驗室做好售后保障。
10. 免費無憂售后，所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開始計算，一年之內，血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。
11. 免費專業幫助，匯集近二十年，千萬個血清用戶細胞培養經驗，為各種細胞培養提供問題梳理分析，解決方案參考。
12. Ausbian品牌擁有全系列血清產品線：
特級胎牛血清、細胞治療專用胎牛血清（貨號：WS500T(紅點)），透析胎牛血清 （貨號：VS500TZ ）等多系列產品，服務更專業更精準。
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務