支原體污染的來(lái)源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染和用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。細(xì)胞培養(yǎng)工作中，主要從以下幾個(gè)方面來(lái)預(yù)防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作；細(xì)胞培養(yǎng)和器材要保證無(wú)菌；在細(xì)胞培養(yǎng)中加入適量的抗生素。
如果受到支原體污染時(shí)，細(xì)胞形態(tài)較之無(wú)明顯變化，極易被忽視，往往直到污染非常嚴(yán)重時(shí)才能發(fā)現(xiàn)。受污染的細(xì)胞膜上可能有幾百個(gè)支原體，這些支原體競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)并釋放有毒的代謝產(chǎn)物，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
『支原體qPCR檢測(cè)試劑盒』介紹
德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒（均為探針?lè)z測(cè)），依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別，
分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。
此兩類試劑盒較其他廠家同類產(chǎn)品，具有以下*的優(yōu)點(diǎn)：
①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求
②高特異性，一次檢測(cè)即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀察。
（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性，其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性，無(wú)交叉反應(yīng)）
第1步：樣本處理
a.細(xì)胞培養(yǎng)上清
b. 生物藥或需遵循藥典的樣本
說(shuō)明：①樣品基質(zhì)可能會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測(cè)定靈敏度。
②細(xì)胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測(cè)靈敏度。
建議：樣本做DNA抽提處理，實(shí)現(xiàn)高靈敏度。
推薦：Venor® Gem Sample Preparation Kit
該DNA抽提試劑盒已經(jīng)過(guò)廣泛驗(yàn)證。
第2步：試劑制備
a. 凍干粉溶解
b. 反應(yīng)體系制備
b1) 樣品為細(xì)胞上清篩查——反應(yīng)體系制備
b2) 樣品為生物藥——反應(yīng)體系制備
第3步：?jiǎn)?dòng)熒光定量PCR儀
第4步：結(jié)果判別
FAM通道：檢測(cè)支原體熒光信號(hào)。HEX通道：檢測(cè)內(nèi)控對(duì)照熒光信號(hào)。
支原體DNA和內(nèi)控DNA存在信號(hào)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制。
支原體DNA越多，F(xiàn)AM通道信號(hào)越高，檢測(cè)內(nèi)控對(duì)照的HEX通道信號(hào)越低。
定量需基于Ct值和DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Ct＜40為陽(yáng)性結(jié)果。Ct≥40為陰性結(jié)果。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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