產(chǎn)品名稱：角膜成纖維細胞*培養(yǎng)基

規(guī)格：100mL/125mL×4
貨號：YS-02X10104

細胞生長實驗 ：細胞生長良好，形態(tài)正常

儲存條件：2℃-8℃，避光儲存

運輸條件：冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

注意事項：

（1）凍存前細胞狀態(tài)，細胞最好在對數(shù)生長期，細胞密度適合，剛剛發(fā)生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

使用步驟：

一）準確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標記劃線，加熱溶解，補充水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。

（四）分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死，但細菌的芽胞有較強的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強，殺菌效果好。

細胞特性：

1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。

2)細胞鑒定：細胞免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式：上皮樣，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
Phospho-eNOS (Ser1177) /FITC 熒光素標記磷酸化一氧化氮合成酶3抗體(內(nèi)皮型)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

 ZW10 peptide/FITC 熒光素標記著絲粒蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體  Caspase-9 0.1ml

Goat  Guinea pig IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

Fbxw7 英文名稱： Fbxw7蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Pokemon 蒙蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

 ZW10 peptide/FITC 熒光素標記著絲粒蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

TLR-9/CD289(Human Toll-like receptor 9) ELISA kit 人Toll樣受體9Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

 Follistatin 卵泡抑素抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse  human IgM/APC APC標記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml

NON(Human nonmethylated oligonucleotide0 ELISA Kit 人非甲基化寡核苷酸 96T

SLITRK6 英文名稱： 神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK6抗體 0.2ml

CSMD3 英文名稱： CSMD3蛋白抗體 0.2ml

 Follistatin 卵泡抑素抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Goat  Guinea pig IgG/Bio 生物素標記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FAM123B 英文名稱： 腎母細胞瘤基因X染色體蛋白抗體 0.2ml

兔抗瓜環(huán)肽抗體  CCP 0.1ml

 NPPC/FITC 熒光素標記促尿鈉排泄肽前體C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PNPO 磷酸吡哆醇氧化酶抗體 規(guī)格 0.2ml

 Phospho-Torc2/Crtc2 (Ser171)/FITC 熒光素標記磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
角膜成纖維細胞*培養(yǎng)基細胞堿性磷酸酶活性染色試劑盒50次哥倫比亞MUG培養(yǎng)基

凍切片堿性磷酸酶活性染色試劑盒50次特 殊蛋白胨培養(yǎng)基原材料，提供豐富的營養(yǎng)成份

全組織堿性磷酸酶活性染色試劑盒10次L-精

細胞樣品氧化酶活性染色試劑盒50次L-丙甲酯鹽酸鹽

凍切片氧化酶活性染色試劑盒50次CBZ-D-丙

全組織氧化酶活性染色試劑盒10次菊糖

細胞過氧化酶活性染色試劑盒50次甲基紅鈉

髓性過氧化酶活性染色試劑盒50次間甲基紅

凍切片過氧化酶活性（pH3.3）染色試劑盒50次1000ul盒裝吸頭

凍切片過氧化酶活性（pH5.5）染色試劑盒50次人表皮生長因子（EGF）ELISA試劑盒,EGF ELISA kit

凍切片過氧化酶活性（pH6.5）染色試劑盒50次人白介素12（IL-12/P70）ELISA試劑盒,IL-12/P70 ELISA kit

凍切片過氧化酶活性（pH7.2）染色試劑盒50次人足標記蛋白/足盂蛋白（PCX）ELISA試劑盒,PCX ELISA kit

凍切片過氧化酶活性（pH7.2超敏型）染色試劑盒50次人高分子量角蛋白（CK-HMW）ELISA試劑盒,CK-HMW ELISA kit

凍切片過氧化酶活性（混合型）染色試劑盒50次人囊蟲病抗體（CYT Ab）ELISA試劑盒,CYT Ab ELISA

全組織過氧化酶活性染色試劑盒10次人乙型肝炎病前S2抗原（HBV preS2Ag）ELISA試劑盒,HBV preS2Ag ELI