產(chǎn)品名稱：惡性黑色素瘤細(xì)胞;A-375

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號：YS-02X9523

細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長良好，形態(tài)正常

儲存條件：2℃-8℃，避光儲存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞特性：

1)】組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對數(shù)生長期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

ER- Alpha(phospho-Tyr537)/FITC 熒光素標(biāo)記抗大、小鼠磷酸化雌受體α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit  dog IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗狗IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml

成纖維細(xì)胞生長因子-10/纖維母細(xì)胞生長因子-10抗體  FGF-10 0.2ml

Goat  Guinea pig IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FOXI1 英文名稱： 叉頭蛋白I1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin(Ser38) 磷酸化原癌基因蛋白18抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit  dog IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗狗IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml

LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1) 管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

 Alkaline phosphatase/PLAP 堿性磷酸酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Abl(Ser735) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 規(guī)格 0.1ml

蛋白酶K濃縮液(20X) 1ml 400ug/ml pH 8.0

VAP1 英文名稱： 血管粘附蛋白1抗體 0.1ml

phospho-DAG1 (Tyr892) 英文名稱： 磷酸化肌相關(guān)蛋白DAG1抗體 0.1ml

 Alkaline phosphatase/PLAP 堿性磷酸酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Streptokinase 英文名稱： 鏈激酶抗體 0.1ml

eIF3K 英文名稱： 真核翻譯起始因子3K抗體 0.2ml

受體相關(guān)蛋白16抗體  TRA16 0.2ml

 TRA16/FITC 熒光素標(biāo)記受體相關(guān)蛋白16抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ITGB4(Tyr1526) 磷酸化整合素β4抗體 規(guī)格 0.1ml

PR (Progestogerone receptor) 孕受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
惡性黑色素瘤細(xì)胞;A-375DBD-NCS [=4-(N,N-二甲基氨磺酰)-7-異硫酸基-2,1,3-苯并惡二唑]重樓皂苷 Ⅶ植物V型ATP酶（V type ATPase ）活性比色法定量檢測試劑盒

氯甲酸-9-芴甲酯(>97.0%(HPLC)(T))總銀杏酸（套）動物線粒體F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

鄰苯二甲(>99.0%(GC))黃芩素動物組織線粒體F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

2-氨基吡啶(>99.0%(GC)(T))胡黃連苷-Ⅱ植物葉綠體F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

2-氨基苯硫酚(>95.0%(T))雷公藤酯甲F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

丹磺酰肼(>95.0%(HPLC)(T))脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯酵母F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

DBD-H [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,3-苯并惡二唑(>98.0%(HPLC))丹參酮ⅡA磺酸鈉A型ATP酶（A type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

NBD-H (=4-肼基-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑肼)(>98.0%(HPLC))芒果苷動物總ATP酶（total ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。

（四）分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。