(一)原代細胞試驗原理

    細胞有絲分裂指數(mitotic index，MI)是指屬于分裂期的細胞占總細胞數的百分率．用于表示細胞增殖旺盛的程度，也可用于檢測藥物對細胞增殖能力的影響。用蓋玻片培養法培養細胞，做固定和染色后，鏡下觀察和計數1000個細胞中處于分裂期的細胞數并計算MI。

(二)材料

1．待檢材料(藥物)。

2．細胞培養成層的貼壁細胞。

3．試劑 甲醇、3％吉姆薩染液。

4．器材CO2培養箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2．2 cm×2．2 cm，需預先清洗和滅菌處理)、塑料培養皿(3．5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹膠。

(三)實驗方法

1．將細胞消化成單個細胞懸液，將細胞懸液分瓶培養，分成不加藥的對照組和加人不同劑量藥物的實驗組。

2．細胞傳代培養的方法培養細胞，并制成濃度為105／ml的細胞懸液。

3．將清洗和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培養皿中，將細胞懸液搖勻后接種于培養皿中，各皿中接種量相同。

4．分別于培養24 h、48ht和72h后從培養皿中取出蓋玻片，在Hanks液中漂洗2～3次。

5．先用甲醇固定30 min，再用吉姆薩染液染色。晾干后用中性樹膠封片。

6．油鏡下或高倍鏡下計數1000個細胞中處于分裂期的細胞數。

7．計算MI按下列公式計算MI。

(四)結果與分析

    將對照組和藥物組的實驗結果繪制成直方圖并加以比較，也可繪制成MI曲線進行比較：

(五)注意事項

1．為了減少誤差，實驗者必須熟悉各期分裂象細胞的形態特征，該實驗自始至終由一人完成，當兩人以上觀察時，應掌握相同的標準。

2．MI曲線與原代細胞生長曲線趨勢基本相似，但不*相同。如果在細胞增長達飽和密壁并進入停止期后．細胞數量很多，而分裂象細胞可*消失。

3．細胞在蓋玻片上的密度常不均勻，細胞密集區與區的分裂象細胞數目可能不同。計數時要選擇密度近似區，以減少實驗誤差。
七甲基三硅氧烷標準品    1873-88-7    七甲基三硅氧烷標準品    Heptamethyl Trisiloxane    150mg
齊多夫定標準品    30516-87-1     齊多夫定標準品    Zidovudine     400mg
齊多夫定相關物質B標準品    25526-94-7     齊多夫定相關物質B標準品        25mg
齊多夫定相關物質C標準品    65-71-4     齊多夫定相關物質C標準品        100mg
齊拉西酮相關物質A標準品    87691-88-1     齊拉西酮相關物質A標準品        10mg
齊拉西酮相關物質C標準品        齊拉西酮相關物質C標準品        10mg
齊拉西酮相關物質D標準品        齊拉西酮相關物質D標準品        10mg
齊留通標準品    111406-87-2     齊留通標準品    Zileuton    150mg
齊留通相關物質A標準品        齊留通相關物質A標準品    Zileuton Related Compound A    50mg
齊留通相關物質B標準品        齊留通相關物質B標準品    Zileuton Related Compound B    50mg
原代細胞