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培養腫瘤細胞的凍存

時間:2017-7-28閱讀:477
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腫瘤細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。 
1. 凍存細胞 
(1)選對數增生期細胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液。 
(2)按常規方法把培養細胞制備成懸液,計數,使細胞密度達5×10 7 /ml左右密度,離心,去上清。 
(3)加入配制好的凍存液(培養液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點降低,使細胞內水分在凍結前透出細胞外。 
(4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。 
(5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標記。 
(6)凍存:在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促進冰晶形成。 
操作時應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷。 細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。 
1. 凍存細胞 
(1)選對數增生期細胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液。 
(2)按常規方法把培養細胞制備成懸液,計數,使細胞密度達5×10 7 /ml左右密度,離心,去上清。 
(3)加入配制好的凍存液(培養液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點降低,使細胞內水分在凍結前透出細胞外。 
(4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。 
(5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標記。 
(6)凍存:在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促進冰晶形成。 
腫瘤細胞操作時應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷。
Daidzin    大豆苷    規格:    20mg/支    進口/國產    大豆甙
Daidzein    大豆苷元    規格:    20mg/支    進口/國產    大豆甙元;黃豆苷元
Genistein    染料木素    規格:    20mg/支    進口/國產    染料木黃酮;金雀異黃酮
Genistin    染料木苷    規格:    20mg/支    進口/國產    5,7-三羥異黃酮-7-糖苷
Imperatorin    歐前胡素    規格:    20mg/支    進口/國產    
Isoimperatorin    異歐前胡素    規格:    20mg/支    進口/國產    
Polygalacic acid    遠志酸    規格:    20mg/支    進口/國產  腫瘤細胞  

 

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