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原代細胞實驗中淋巴細胞轉化的實驗

時間:2018-3-7閱讀:206
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原代細胞實驗中正常機體的T淋巴細胞在體外培養過程中受到特異性抗原或有絲分裂原刺激。可轉化為淋巴母細胞。細胞免疫缺陷時,患惡性腫瘤或某些其他疾病時。轉化率顯然降低。目前zui常用植物血凝素(PHA)作為分裂原來檢測受試者的淋巴細胞轉化率,從而判定其細胞免疫功能,稱為PHA刺激淋巴細胞實驗的轉化實驗。
實驗材料       
肝素
試劑、試劑盒    
199培養液小牛血清鏈霉素青霉素PHA
儀器、耗材    
注射器針頭試管吸管離心機
實驗步驟       
1.  采肝素抗凝血1~2毫升(1毫升血中加肝素20單位)充分混勻。37℃靜置1~2小時。紅細胞沉淀后,吸取血漿層并捎帶些紅細胞。移入另一無菌試管中。計算白細胞數然后2000 rpm 離心10分鐘。棄上清液。用199培養液將沉淀的白細胞配成1×107/毫升細胞懸液。
2.  取細胞懸液0.6毫升(6×106細胞)加入含有2.4毫升199培養液的培養瓶中。
3.  按每毫升營養液加30 ug PHA加入PHA。
4.  37℃孵育68~72小時。培養過程中,每天翻動培養瓶1~2次。
5.  培養后。振蕩培養瓶。將細胞重新懸起,然后移入試管中。
6.  1000 rpm 離心5分鐘。
7.  盡量棄去上清液,將沉淀物混勻,取一滴放在載玻片上,推成血膜(頭、體、尾分明)干燥,用瑞特氏染液染色)鏡檢。
8.  原代細胞實驗中計算淋巴細胞的轉化率:油鏡下觀察每張玻片的頭、體、尾三段。每段各一縱列(目的是減少推片中細胞分布不均的誤差)。
9.  每張玻片記數200~400個細胞,計算轉化率其中頭部50~100,體部50~100,尾部100~200細胞。 一般認為轉化率的正常值為60~70%
Acetaminophen    對乙酰氨基酚標準品    103-90-2    400mg
8-Bromotheophylline    8-溴茶堿標準品    10381-75-6    400mg
    ALPHA-乳白蛋白標準品        400mg
    氟化牙粉:單氟磷酸鈉/磷酸氫鈣標準品        4.6oz
    氟化牙粉:單氟磷酸鈉-碳酸鈣標準品        4.6oz
    氟化牙粉:氟化鈉/二氧化硅標準品        4.5oz
Methyl Alcohol     甲醇標準品    67-56-1     3x1.5ml
Diethanolamine    二乙醇胺標準品    111-42-2    3ml
    三乙醇胺標準品    102-71-6     3ml
    帕立骨化醇溶液標準品        3ml
    曲沃前列素標準品        3ml
Potassium Bitartrate (AS)    酒石酸氫鉀標準品    868-14-4     3g
原代細胞

 

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