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Bradford蛋白濃度測定試劑盒使用方法:
1、 取1ml蛋白標準配置液加入到25mgBSA的蛋白標準管中,*溶解蛋白標準品,即為25mg/ml的蛋白標準溶液。配制成的蛋白標準溶液 可-20℃長期保存。
2、 取適量25mg/ml蛋白標準溶液,稀釋至終濃度為0.5mg/ml。標準品與蛋白樣品用同樣的溶液稀釋。但為了簡便起見,通常使用 0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。
3、 做標準曲線。將標準品按0,1,2,4,8,12,16,20ul加到96孔板中,不足20ul的加標準品稀釋液補足到20ul。
4、 將待測的蛋白樣品稀釋至合適濃度,加到96孔板中,使待測樣品總體積也為20ul。
5、 每孔加入考馬斯亮藍G250溶液200ul,充分混勻(可將酶標板放在振蕩器上振蕩30s),室溫放置3-5min后,以標準曲線0號做參比,在 595nm波長下比色測定,記錄各孔吸光度值。以標準品蛋白含量(ug)為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪出標準曲線。
6、 如用分光光度計測定,請在第三步的時候將標準品體積改為1ml,濃度梯度用生理鹽水稀釋為0,1,2,5,10,15,30ug/ml。或根據樣 品調整濃度梯度。
7、 將樣品稀釋至合適濃度,加到小試管中,使待測樣品總體積也為1ml。
8、 每只試管加考馬斯亮藍G250溶液3ml,充分混勻,室溫放置3-5min后,以標準曲線0號做參比,在 595nm波長下比色測定,記錄各孔吸光度值。
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