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小鼠小扁豆素結合型甲胎蛋白操作步驟

時間:2020/10/27閱讀:264
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小鼠小扁豆素結合型甲胎蛋白操作步驟

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫,試劑不能直接在37℃溶解;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50?l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40?l,然后再加待測樣品10?l(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

2、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

3、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

5、加酶:每孔加入酶標試劑50?l,空白孔除外。

6、顯色:每孔先加入顯色劑A50?l,再加入顯色劑B50?l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.

7、終止:每孔加終止液50ml,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

8、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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