*，干細胞mTeSR™1是文獻發表的hPSC培養基，cGMP級別且無需飼養層，引用文獻超過1500篇，被廣泛用于各種前沿的hPSC研究中，包括基因編輯和3D懸浮培養等。在接下來的幾期推送中，我們將推出hPSC維持培養專題，詳細介紹多能干細胞的維持培養、傳代、凍存和解凍等。
細胞在mTeSR™1培養的形態

未分化的人ES細胞和iPS細胞在mTeSR™1中培養，形成緊密的多細胞集落，具有清晰的邊界。細胞間緊密的堆積起來，具有高核質比，且核仁顯著。健康的集落會無縫的融合起來，在中心有多層細胞，在相襯顯微鏡下觀察， 成緊密的細胞簇。mTeSR™1中培養的集落在Vitronectin XF™上生長時更緊密且更圓，而使用Corning® Matrigel®生長的集落則較為分散且形狀不規則。 在這兩種基質上，自發性分化的特征表現為失去集落邊界的完整性，一個集落內有不規則的細胞形態區域，或者出現其他的細胞類型等。

使用mTeSR™1進行培養時如何確定傳代時間

在mTeSR™1中培養的人ES和iPS細胞，當大多數集落長得大，緊密，集落的中心比邊緣更致密的時候，就可以傳代了。使用其他培養基時集落形態會有所不同。在mTeSR™1中鋪板第4天，集落可能還沒有顯示非常致密的細胞堆積，但四天后，集落的密度和大小會迅速增加，同時在傳代之前的1-2天，集落的形態也會發生顯著的變化。

如果將集落傳代的太早或者太頻繁，在鋪板的時候，細胞聚集體也許會變得不貼壁，導致產率降低，而且細胞也可能會開始分化（出現其他的細胞種類和不同的形態）。如果傳代時間太晚，培養物可能會開始出現分化的跡象。大概會有24 - 48小時的*傳代時間窗口。如果出現較大的集落，并具有有致密的中心，需要在24小時內傳代。

3. 試劑和材料的準備

3.1 配制mTeSR™1*培養基

使用無菌操作制備mTeSR™1的*培養基（基礎培養基 + 5X 添加物）。下面的示例是配置500 mL的*培養基。如需準備其他體積，請按照比例調整。
注意：在室溫（15 - 25°C）融解添加物和*培養基，或者2 - 8°C過夜融解。不可使用37°C 水浴解凍。

（1） 將mTeSR™1 5X 解凍添加劑并*混勻。
注意：一旦解凍，立即使用或者分裝并儲存于 -20°C，于 -20°C可存貯3個月。不要超過添加劑的有效期。分裝的添加劑融解后，立即使用。不可再次冷凍。

（2） 將100 mL 的mTeSR™1 5X添加劑加入到400 mL的mTeSR™1基礎培養基中，*混勻。
注意：如果不立即使用，mTeSR™1*培養基可以在2 - 8°C存儲2周。或者分裝并儲存于 -20°C可達6個月。不可超過每個單獨組分的有效期。分裝的*培養基融解后，立即使用或者在2-8°C保存可達2周。不要重新冷凍。
如果干細胞是無菌制備，mTeSR™1*培養基可以立刻使用。如果需要，也可以用0.2 μm低蛋白濾器過濾。
1-acetoxy-5-deacetyl-baccatin I    ≥98%
2,3,5,4-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-o-glucoside    ≥98%
20(22)-ene-PPD    ≥97%
20(S)-Ginsenoside C-K    ≥98%        
20(S)-Protopanaxadiol saponins    ≥98%        
Anemosapogenin    ≥98%        
25-OH-Protopanaxdiol    ≥97%
25-OH-Protopanaxtiol    ≥97%
2-O-galloylhyperin    ≥98%        
2-Hydroxyeupatolide    ≥97%        
3’-methoxy-5’-hydroxyisoflavone-7-O-β-D-glucoside    95%
4-Hydroxyisoleucine    ≥98% ≥97%
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