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上海力陽實業有限公司
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了解一下激光共焦顯微鏡的發展背景

閱讀:283發布時間:2020-5-13

   激光共焦顯微鏡是20世紀80年代中期發展起來并得到廣泛應用的新技術,它是激光、電子攝像和計算機圖像處理等現代高科技手段滲透,并與傳統的光學顯微鏡結合產生的先進的細胞分子生物學分析儀器,在生物及醫學等領域的應用越來越廣泛,已經成為生物醫學實驗研究的*工具。

  傳統熒光顯微鏡使用熒光物質標志細胞中的特定結構,不僅圖像與背景的對比度增強,而且由于許多熒光顯微鏡的光源使用短波長的紫外光,大大提高了分辨率(δ=0.61·λ/NA,其中δ為顯微鏡的分辨率;λ為照明光線的波長;NA為物鏡的數值孔徑)。

  但當所觀察的熒光標本稍厚時,傳統熒光顯微鏡一個難以克服的缺點就顯現出來:焦平面以外的熒光結構模糊、發虛。原因是大多數生物學標本是層次區別的重疊結構(如耳蝸基底膜。

  其實是外毛細胞、多種支持細胞、神經纖維等組成的空間結構),在普通光學顯微鏡下聚焦平面的變化,會表現出不同的形態。假若熒光標記的結構在不同層次上都有分布,且重疊在一起,反射熒光顯微鏡(epifluorescentmicroscope)不僅從焦平面上收集光量,而且來自焦平面上方或下方的散射熒光也被物鏡所接收,熒光顯微鏡的光學分辨率就要大大降低。

  在傳統光學顯微鏡基礎上,激光掃描共聚焦顯微鏡用激光作為光源,采用共軛聚焦原理和裝置,并利用計算機對所觀察的對象進行數字圖像處理觀察、分析和輸出。

  其特點是可以對樣品進行斷層掃描和成像,進行無損傷觀察和分析細胞的三維空間結構。

  同時,利用免疫熒光標記和離子熒光標記探針,該技術不僅可觀察固定的細胞、組織切片,還可以對活細胞的結構、分子、離子及生命活動進行實時動態觀察和檢測,在亞細胞水平上觀察諸如CapH值,膜電位等生理信號及細胞形態的變化,成為形態學、分子細胞生物學、神經科學、藥理學、遺傳學等領域中新一代強有力的研究工具,極大地豐富了人們對細胞生命現象的認識。


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