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酶標(biāo)儀的試驗法(ELISA)原理是什么

閱讀：2963 發(fā)布時間：2018-8-30

　　我們到醫(yī)院去拍片所用到的那些儀器設(shè)備都有它的工作原理所在，如果工作人員了解了這些醫(yī)療器械的工作原理就能更好的運用儀器。還能幫助工作人員更好的完成工作。酶標(biāo)儀是我們生活中應(yīng)用的非常廣泛的醫(yī)療設(shè)備，下面就酶標(biāo)儀的免疫吸附試驗的基本原理講解一下：

　　(一)先將過量的特異抗體(或抗原)包被于載體(酶標(biāo)板)上，通過抗原抗體反應(yīng)使待側(cè)物質(zhì)(抗原或抗體)和酶標(biāo)記物(用HRP-辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體或抗原)也結(jié)合在載體上(固相分離)，經(jīng)洗滌去除游離的酶標(biāo)記物后，加入底物，已經(jīng)結(jié)合在載體上的標(biāo)記酶促使底物顯色。終利用光電比色法，對待測物進行定性判斷或定量測定。

　　以上方法的檢驗靈敏度可以達到ng/ml水平。

　　(二)包被酶標(biāo)板：將特異抗原溶液加入酶標(biāo)板孔內(nèi)，4℃過夜。然后用洗滌液洗滌3次到5次(洗板機洗板)，這樣溶液中的特異抗原被牢固吸附在酶標(biāo)板的微孔表面，形成固相抗原，殘液及雜質(zhì)被清洗掉。

　　(三)加入被測樣本液(病人血清)：樣本液中若含有待測抗體，經(jīng)過溫育反應(yīng)，則與已包被的抗原產(chǎn)生特異結(jié)合，生成包被抗原與待測抗體的復(fù)合物，被吸附在酶標(biāo)板的微孔表面。然后再次進行洗滌，去除殘液及干擾物質(zhì)。

　　(四)加酶結(jié)合物：經(jīng)過溫育反應(yīng)，生成包被抗原加待測抗體加酶標(biāo)抗原的三者復(fù)合物，同樣被吸附在微孔表面，然后再次洗滌，去除游離的或非特異沾附的酶結(jié)合物(洗板)。

　　(五)加顯色液：經(jīng)過10分鐘到20分鐘的顯色反應(yīng)，被吸附的復(fù)合物中的酶與顯色底物液生成有色溶液。此時，由于游離或非特異吸附的酶已被清除，所以溶液顏色的深淺，僅決定于已與待測物結(jié)合的酶的量，因此能真實反映待測物的濃度。被固化的酶越多，顯色就會越深，這就說明待測物的濃度越大。

　　(六)加終止液：終止顯色反應(yīng)。

　　使用酶標(biāo)儀檢驗：把完成顯色的酶標(biāo)板放在酶標(biāo)儀儀器上進行光電比色檢驗，儀器分別檢測空白孔、陰陽性對照孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、質(zhì)控孔和患者樣本孔的吸光度值，并自動按程序要求計算出患者樣本中待測物的濃度或進行定性分析。

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