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梯度液相色譜儀梯度洗脫時為何產(chǎn)生“鬼峰”
梯度液相色譜儀是目前應(yīng)用較多的色譜分析方法，液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，針對其流動相為液體的特點作出很多調(diào)整。
梯度洗脫帶來的“鬼峰”來源很多，其中主要來源于流動相和管路，幾乎都有一個共同的機制：
當(dāng)流動相具有較高的洗脫強度時，流動相中有紫外吸收的有機雜質(zhì)在柱上聚焦成組分帶，并隨后在梯度中洗脫。這些流動相雜質(zhì)的潛在“來源”是廣泛的(如有機相中污染物，水相中污染物，緩沖鹽類，流動相瓶和混合過程產(chǎn)生等)。其他原因包括流動相輸送的物理或機械方面、樣品引入和固定相效應(yīng)。各種來源的鬼峰，讓鬼峰處理變得非常困難。
在色譜分離中，縱向擴散會增加分離組分帶寬。等度液相色譜中，盡量在縱向擴散超出接受范圍之前洗脫。在梯度洗脫色譜，因為流動相配比的變化導(dǎo)致動態(tài)壓縮組分帶的主動聚焦機制(帶/峰壓縮)。梯度色譜運行，是峰寬擴散和聚焦同步過程的產(chǎn)物。
聚焦機制可想象一個組分帶廣泛擴散在高效液相色譜柱的頂部。當(dāng)施加溶劑梯度時，帶后部的有機溶劑濃度總是高于帶前部。帶前的組分分子比帶后的組分分子更強地被固定相保留，帶后的成分分子更快移動，導(dǎo)致落后的組分分子會被更強的洗脫液聚集，并更快地向前移動以趕上其余的。
帶聚焦機制可聚焦流動相中存在的有機雜質(zhì)。在低洗脫劑濃度下有一定保留的雜質(zhì)可能會隨著梯度逐漸聚集成峰。在充分聚焦后，流動相鬼峰與分析物峰形接近或相同，聚焦不*時，它們會變得更寬或變成其他形狀。理想梯度的液相色譜流動相到達梯度最大，該處應(yīng)僅包含預(yù)期的溶劑和試劑，不包含其他物質(zhì)。梯度高效液相色譜分析的不只是樣品，也分析流動相的雜質(zhì)和儀器路徑的溶劑。為了區(qū)分真實的分析物峰和這些鬼峰，必須進行空白進樣的檢查（溶劑空白）。