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影響峰漂移的常規(guī)因素有哪些?

閱讀:2660      發(fā)布時間:2022-12-29
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相信大部分實驗室工作者在日常檢測中,或多或少都有遇到過讓大家比較頭痛的一個實驗現(xiàn)像就是:當我們連續(xù)進樣的時候,樣品的保留時間不能重現(xiàn),主要分為保留時間漂移和保留時間波動。顧名思義前者是指保留時間僅沿單方向發(fā)生變化,而后者指保留時間無固定規(guī)律的波動。一般在查找原因時將此兩種情況區(qū)分開來排查,對找到問題的原因往往很有幫助。

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導(dǎo)致樣品保留時間漂移和保留時間波動

幾種最常見的原因

色譜柱平衡

如果我們觀察到保留時間漂移,首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動相wan全平衡。通常平衡需要10-20個柱體積的流動相,但如果在流動相中加入少量添加劑(如離子對試劑)則需要相當長的時間來平衡色譜柱。

固定相穩(wěn)定性


固定相是否穩(wěn)定也是保留時間漂移原因之一,固定相的穩(wěn)定性都是有限的,即使在推薦的PH范圍內(nèi)使用,固定相也會慢慢水解。例如,硅膠基質(zhì)在pH4時水解穩(wěn)定性最好。水解速度與流動相類型和配體有關(guān)。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩(wěn)定;長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定;烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。

其他硅膠基質(zhì)鍵合相在高比例水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解,如氨基鍵合相等。

流動相組成



流動相組成的緩慢變化也是保留時間漂移的常見原因。如流動相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動相等。流動相污染也可能是原因之一。溶于流動相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上,從而造成保留時間的漂移。建議及時更換新的流動相。

疏水坍塌


當反相填料色譜柱使用接近100%的水為流動相時,有時會發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或wan全不保留的現(xiàn)象,這就是疏水坍塌。此現(xiàn)象是由流動相不浸潤固定相表面而致。當色譜柱出現(xiàn)疏水坍塌也是保留時間漂移的常見原因。常規(guī)的C18柱已經(jīng)可以在95%左右的水相環(huán)境下正常使用而不發(fā)生疏水塌陷現(xiàn)象。純水中使用,則建議使用經(jīng)過修飾改性的專用耐水柱進行實驗(例如月旭的Ultimate® AQ-C18)。

色譜柱污染

保留時間漂移的另一個常見原因是色譜柱污染。如方法已經(jīng)建立,在開始時沒問題,在使用一段時間后出現(xiàn)這個問題,可能是由于色譜柱污染引起的。這時需要對色譜柱加強沖洗,即使用比方法流動相更強的溶劑沖洗色譜柱。也可以在檢測樣品基質(zhì)比較臟時提前加保護柱。

其他因素

如果泵或者管路中有氣泡,保留時間會前后漂移,可通過排氣等將氣泡趕出。泵單向閥中的寶石球磨損,造成流動相倒流,壓力不穩(wěn)定,保留時間會前后漂移。解決辦法是更換部件。泵比例閥控制失靈,不同流路流動相比例不斷變化,保留時間會前后漂移。解決方法是更換部件。泵活塞桿密封墊老化,流動相滲漏。解決辦法是換密封墊。在線混合器混合能力變差,不接梯度測試混合能力,并同手工配置流動相比較。

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