背景
葉黃素、玉米黃質、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素是天然植物性食品中w常見的5種類胡蘿卜素類營養物質，具有維生素A原活性、抗氧化、參與細胞傳遞、免疫功能調節與促進、保護皮膚免于紫外線傷害和抑制黃褐斑生成等諸多生理保健功效。
但這5種類胡蘿卜素類營養物質的液相色譜同時分離測定一直比較困難，原因是這5種類胡蘿卜素類營養物質之間的極性差異比較大，葉黃素和玉米黃質分子結構中有兩個羥基，極性較強，在反相液相色譜柱（如C18等）上的保留力較弱，而α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素是烴類物質，僅由碳和氫兩種原子構成，無任何極性官能基團，極性極弱，在反相液相色譜柱（如C18等）上的保留力*；另外，更為重要是葉黃素和玉米黃質之間，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間，兩兩互為同分異構體，相互間僅是一個碳-碳雙鍵的位置差異，液相分離難度大（分子結構詳見附錄A，特征吸收光譜圖詳見附錄B）。
本應用案例采用月旭科技公司生產的C30反相高效液相色譜柱、兩元梯度洗脫，實現了單次高效液相色譜檢測對葉黃素、玉米黃質、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營養物質的分離檢測，且單次高效液相色譜檢測費時為35分鐘。
高效液相色譜檢測條件
1 儀器設備 Welch 高效液相色譜儀，WiSys5000，配備二級管陣列檢測器；
2 液相色譜柱
分析柱：Ultimate XB-C30色譜柱，4.6mm×250mm, 5μm；
保護柱：Ultimate XB-C30，4.6mm×10mm, 5μm；
3 流動相 A相：甲醇:乙腈=1:1；B相：乙酸乙酯；
4 梯度洗脫程序
5 流速 1.0mL/min；
6 檢測波長 476nm；
7 柱溫 30℃；
8 進樣體積 20μL。
高效液相分離色譜圖
從高效液相檢測的色譜圖看，不僅單次檢測，35分鐘內實現同時分離檢測葉黃素、玉米黃質、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營養物質，而且互為同分異構體的葉黃素和玉米黃質之間，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間，都基本實現了基線分離。
相關色譜耗材
附錄A：5種類胡蘿卜素天然營養物質的分子結構
附錄B：5種類胡蘿卜素天然營養物質的特征吸收光譜圖
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